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重型乙型肝炎是乙型病毒性肝炎的一种临床表现形式，其病情凶险，病死率高，在我国，每年约有1％的乙型肝炎患者发生重型肝炎。重型肝炎的发病机理至今不清，通常认为由宿主免疫状态和病毒两方面决定。 第一部分：HBV前S2基因变异与重型乙型肝炎的相关性 重型肝炎的发病可能与HBV病毒变异有关。在HBV DNA前S2区、前C区及C启动子区，均有报道存在变异，但到目前为止，尚未发现特异位点的变异。本研究通过检测25例重型乙型肝炎和20例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA前S2区变异情况，观察HBV前S2区变异与重型肝炎的相关性。 病例选自1999～2002年我院收治的HBV DNA阳性的重型乙型肝炎患者25例(编号FH)，男21例，女4例，年龄25～56岁，其中FH(1)，FH(S24)为急性重型肝炎，既往无肝炎病史，其余23例为慢性重型肝炎，既往有肝炎病史；HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎20例(编号C)，男15例，女5例，年龄20～52岁。诊断标准根 2003浙江人学博卜论义据2000年9月西安中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的病毒性肝炎防治方案。甲、丙、丁、戊肝炎病毒血清学检测均阴性，抗EBVIgM和CMVIgM均阴性。血清留取后置工0OC冻存，统一检测。 血清标本经酚氯仿抽提，聚合酶链反应（PCR）扩增HBV前SZ基因片段，上游弓物 SPSZ 为 5’TCAGGCTCAGGGCATA3’（nt 3092－31 07），下游弓物 ASPSZ 为5’AACCCCGCCTGTAACACGAG 3’（nt 193－212）。反应体系为50ul，包括luldNTP（10mM，sul 10xbuffer含 Mg‘”），1．sul SPSZ（10pmol／l），1．sul ASPSZ门op一1／u厂0．suITag酶6Wul），sul模板＊＊＊35．5ul ddo0。反应条件为95℃预变性：3mln，95C变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸45秒，共30个循环后，72OC延伸7min。扩增产物直接测序。并用酶联免疫反应测定血清HbsAg，HbsAb，Presl－Ag，Presl－Ah，PreSZ－Ag，PreSZ叭 浓度。 结果观察到25例重型肝炎，其中23例既往有慢性肝炎病史，2例前SZ基因起始密码于发生变异（ATG—ACT，ATG－ATA），推测氨基酸改变（M—T，M－I）；2例既往无肝炎病史的急性暴发性肝炎，则未观察到起始密码子变异。同时20例慢性肝炎患者中，有3例起始密码子发生变异（ATG—ATA，ATG—GTG），推测氨基酸改变（M—I，M－V）。根据本文的结果，我们认为前SZ基因起始密码于变异在既往有慢性肝炎病史的慢性重型肝炎和慢性肝炎患者中均有可能存在。 5例前 SZ 基因起始密码子发生变异患者的外周血清 HBsAg，HBsAb，Presl－Ag，Presl－Ah，PreSZ－Ag，PreSZ叭 浓度狈定结果，5例患者HBsAg均为阳性，4例患者Presl－Ag卜性，而PreSZ－Ag均为阴性。结果提示，前SZ 基因起始密码变异后，HBsAs，PreSI叭g仍可以合成、分泌到外周血，但因为 PreSZ叭g不能合成，可能会导致大、 二 2003浙江大学博十论义中、小三种蛋白比例的失衡，后者被认为可能是肝细胞损害的原因之一。 本文的结果还发现，30－49位氨基酸是重型肝炎变异比较集中的位点，此区域位于前SZ区的T细胞表位内，共有9例（9／25）重型肝炎在此区域内发生点突变或缺失突变，而 2例（2／20）慢性肝炎发生点突变（P（．05）。此区域变异与重型肝炎异常的兔疫应答之间何为因果，尚待进一步的研究。 第二部分：血清HBV特异性免疫复合物与重型乙型肝炎的关系 本研究通过检测重型乙型肝炎病人血ig HBV特异性免疫复合物的含量，建立一个可以较简便地测定外周血HBV特异性免疫复合物的方法，初步探讨HBV特异性免疫复合物和重型乙型肝炎的关系，从而为进一步研究HBV特异性免疫复合物在乙型肝炎、尤其是重型乙型肝炎发病中的作用打下基础。 病例选自1999～2002年我院收治的重型乙型肝炎患者80例，男56例，女24例，年龄20～64岁，其中急性重型乙型肝炎5例，亚急性重型乙型肝炎2例，慢性重型乙型肝炎刀例。诊断标准根据2000年9月西安中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的病毒性肝炎防治方案。甲、丙、丁、戊肝炎病毒血清学检测均阴性，抗EBVIgM和CMVIgM均阴性。 采用聚乙二醇（PEG MV6000）沉淀法，以HBSAg－HBSAb免疫复合物为例，用PEG将HBSAg－HBSAb免疫复合物沉淀后，加入胃蛋臼酶进行消化，将免疫复合物中HBSAg解离出来，再用ELISA法检测解离前后HBSAg，由此判定HBS二C含量。 十据卜述方法讳备的HBSAg－抗－HBS、HBeAg。抗－HbC、pfCSI Ag－抗－pfCSI、prCSZAg－抗－PreSZ循环免疫复合物阳性对照品，选择解离／未解离）2．0为阳性界限均能 3