鸡肉中金刚烷胺、喹乙醇代谢物、氯霉素残留免疫分析方法的建立

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近年来鸡肉安全问题引起人们广泛关注,兽药残留是影响鸡肉安全的一个重要因素,其中鸡肉中抗生素和抗病毒药物残留问题尤为突出,目前针对违禁兽药的快速、灵敏的免疫检测技术发展迅猛。违禁兽药金刚烷胺(Amantadine,AMA)、氯霉素(Chloramphenicol,CAP)、喹乙醇(Olaquindox,OLA)曾作为抗病毒药物或抗生素,被非法添至动物饲料、注射药剂及内服药剂中,用于养殖业中动物疾病的预防和治疗。由于金刚烷胺、喹乙醇、氯霉素在动物源性食品及环境中的残留易导致致病菌株产生耐药性,且对于人体及动物均具有血液毒性、免疫毒性和胚胎毒性等,严重威胁消费者健康。因此,加强对三者的监控十分必要。目前对金刚烷胺、氯霉素及喹乙醇代谢物(3-Methyl-quinoxaline-2-carboxylic acid,MQCA)的分析手段主要有液相色谱、液相色谱-串联质谱法等仪器法,虽然这些方法准确可靠,但成本高、操作复杂耗时、通量低、不易普及,而免疫分析法具有快速、灵敏、低成本、便于现场操作等特点,作为初筛方法,可与仪器法搭配使用,满足大批量样品的快速筛查需求。因此本研究通过优化试验条件,建立快速准确检测鸡肉中的金刚烷胺、氯霉素、喹乙醇代谢物残留的ic-ELISA方法(indirect competitive ELISA,ic-ELISA)。结果如下:(1)成功建立了快速检测金刚烷胺残留的ic-ELISA。方法对金刚烷胺IC50为0.69μg/L,线性检测范围为0.07-6.15μg/L,检出限为0.21μg/L,与金刚烷胺其余结构及功能类似物均无交叉反应,方法特异性较好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;添加回收率均101.69%-108.71%,变异系数<15%;与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好,方法适用于实际样品检测。(2)成功建立了快速检测喹乙醇代谢物MQCA的ic-ELISA。方法对喹乙醇代谢物IC50为1.88μg/L,线性检测范围为0.49-7.27μg/L,检出限为0.32μg/L,与MQCA其余结构及功能类似物均无交叉反应,方法特异性较好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;添加回收率均在90.44%-107.16%之间,变异系数<15%;与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好,方法适用于实际样品检测。(3)成功建立了快速检测氯霉素的ic-ELISA。方法对氯霉素IC50为0.12μg/L,线性检测范围为0.02-0.70μg/L,检出限为0.019μg/L,与氯霉素其余结构及功能类似物均无交叉反应,方法特异性较好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;添加回收率均在74.02%-113.48%之间,变异系数<15%;与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好,方法适用于实际样品检测。(4)对氯霉素和金刚烷胺样品前处理方法进行合并。方法比较了不同提取剂和震荡时间的提取效率,最终采用乙酸-乙腈提取2 min,方法简便,为兽药多残留检测提供了新的思路。
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