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丛枝菌根真菌（Arbuscular Mycorrhizal Fungus,AM）能与植物根系形成互惠共生体,促进植物生长发育,改善矿质营养,提高抗逆性等,在农业和林业上有着广泛的应用前景,但AM真菌是专性活体营养微生物,至今无法实现离体纯培养。本试验以烟草品种NC82、Va116为宿主植物,获得烟草无菌苗;用发根农杆菌C58C1、A4侵染受伤叶片,获得烟草Ri T-DNA转型根（毛状根）,筛选发根农杆菌菌种和烟草品种最佳组合;对几种AM真菌孢子进行形态学和分子生物学鉴定,孢子的消毒、萌发、筛选较好的消毒处理;将萌发的几种AM真菌孢子与烟草毛状根共培养,对共生培养体系进行了检测。获得以下结果:1、NC82和Va116烟草种子采用75%乙醇消毒60s,再10%次氯酸钠消毒15min,无菌水冲洗3次,接种于MS固体培养基,25℃恒温培养,萌发效果最好,萌发率高达到80%以上,污染率小于15%。2、当发根农杆菌A4、C58C1菌液OD600值在0.6～0.8时,侵染烟草NC82、Va116无菌苗的叶片,发根农杆菌A4对NC82、Va116的诱导率分别为23.33%、21.43%;发根农杆菌C58C1侵染NC82、Va116的诱导率差异较为明显,分别为70.97%、35.71%。筛选出能快速诱导产生烟草毛状根的组合是发根农杆菌菌种（C58C1）和烟草品种（NC82）。3、采用3种消毒方式对黄孢球囊霉Glomus flavisporum、幼套近明球囊霉Claroideoglomus etunicatum和蜜色无梗囊霉Acaulospora mellea孢子消毒。Glomus flavisporum孢子较好的消毒处理是方法1:2%（w/v）氯胺T+2滴0.25%（v/v）Tween20（A液）处理12min、0.02%（w/v）硫酸链霉素和0.01%（w/v）硫酸庆大霉素（B液）处理15min和方法3:差别灭菌（A液、B液混合）消毒12min;Claroideoglomus etunicatum孢子较好的消毒处理是方法1:A液处理10min、B液处理15min和方法3消毒10min;Acaulospora mellea孢子较好的消毒处理是方法3:消毒10min和方法1:A液处理10 min、B液处理12min;这几种消毒处理的萌发率较高,污染率均≤15%,是较理想的消毒处理。4、在水琼脂培养基中添加外源添加物（NaCl、SPM、GR24）,都提高了Glomus flavisporum、Claroideoglomus etunicatum和Acaulospora mellea 3种孢子的萌发率。在水琼脂中加入SPM对Glomus flavisporum、Claroideoglomus etunicatum孢子萌发均有显著的促进作用,而在水琼脂中加入NaCl、GR24对Glomus flavisporum、Claroideoglomus etunicatum和Acaulospora mellea 3种孢子的萌发仅有增加的趋势。对孢子进行形态学和分子鉴定,对孢子进行基因检测,建立系统发育树,分别进一步证明萌发的孢子为Glomus flavisporum、Claroideoglomus etunicatum、Acaulospora mellea。5、经过4个月的共生培养,可观察到菌丝侵入毛状根、丛枝结构（BAS）和大量的菌丝体;利用碱解离–酸性品红染色法进行菌根染色,观察到了丛枝和泡囊的存在,其侵染率为17.3%,表明幼套近明球囊霉Claroideoglomus etunicatum与烟草毛状根的离体双重培养体系已成功建立。本试验筛选出了适合烟草种子的最适消毒处理,获得了大量烟草无菌苗和烟草毛状根;成功地建立了烟草毛状根与幼套近明球囊霉的双重培养体系。试验结果为幼套近明球囊霉Claroideoglomus etunicatum菌剂的规模化生产和应用提供了技术参考。