涡虫再生相关差异蛋白质组的研究

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再生是机体通过形成新的组织或器官来替代受伤或被切割的组织或器官,进而修复整个机体的过程。在生物界中,普遍存在着再生现象,该现象启发了科学家对于再生机理的研究。淡水涡虫(Schmidteam editerranea)又称真涡虫(简称涡虫),属于扁形动物门,是一类营自由生活的动物。由于其具有极其惊人的再生能力,是再生研究中的理想模式生物。对涡虫再生机理的研究,有助于我们进一步研究人的再生机理,对于器官的再生与移植等的研究具有重要的科学意义。本实验拟以涡虫的正常组织与再生组织为研究对象,以蛋白质组学的相关技术为手段,通过双向凝胶电泳分离涡虫组织的总蛋白,构建两种不同状态下涡虫的蛋白表达谱,并经过分析比较,找出差异表达蛋白。然后对这些蛋白进行质谱分析与生物信息学分析。由此确定再生中特异表达的蛋白质,可进一步探讨编码这些蛋白的基因在再生中的作用。首先分别提取涡虫正常与再生三天的组织总蛋白,经洗涤沉淀后分别将正常组织与再生组织的总蛋白进行双向凝胶电泳分离,通过银染色,UMax Powerlook扫描仪扫描,并通过ImageMasterTM软件进行图像分析,找出差异表达的蛋白点,并切取此差异蛋白点进行酶解,然后进行串联基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MADLI TOF-TOF)分析得到肽质量指纹图谱(PMF),在NCBInr数据库中使用Mascot软件在蛋白质数据库中搜索得到所鉴定的差异蛋白质。之后根据所得到的每个蛋白质点的肽段,通过在涡虫数据库中搜索得到所对应的氨基酸序列以及核苷酸序列。结果:得到了重复性与分辨率较好的正常组织与差异组织的双向电泳凝胶电泳图,并通过PDQuest软件分析,我们得到了132个差异表达的蛋白点,选择21个差异表达显著的蛋白点进行了质谱分析。通过质谱鉴定,发现在正常组织中高表达的蛋白有15个,再生组织中高表达的蛋白点有3个,只在正常组织中表达的蛋白有2个,只在差异组织中表达的蛋白有1个。通过比较涡虫正常组织与再生组织的差异蛋白,发现这些蛋白大多都存在两种组织中,只是在再生中成下调表达,表明这些蛋白质可能在涡虫的再生过程中发挥着一定的作用。
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