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目的静宁颗粒为临床经验方,治疗小儿多动症疗效显著。本课题通过测定毛蕊花糖苷、细叶远志皂苷、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素六种成分的转移率并结合药效试验优选静宁颗粒的最佳工艺;确定最优工艺后并通过外翻肠囊模型确定静宁颗粒被吸收入肠的主要成分,并对这些成分进行了平衡溶解度和表观油水分配系数的测定;随后采用在体肠灌流模型探讨静宁颗粒中吸收入肠成分在不同pH环境、不同肠段和不同浓度的肠吸收情况;考察处方中其它药物对肠吸收成分的影响,从而为指导静宁颗粒临床合理应用奠定基础。方法1将静宁颗粒复方按照五种工艺分别进行制备并采用HPLC法对五种工艺干膏中的毛蕊花糖苷、细叶远志皂苷、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素六种成分含量进行测定。2采用外翻肠囊模型,结合HPLC-DAD检测法对比熟地黄西洋参共水提物、枸杞子茯苓石菖蒲共水提物、远志五味子共醇提物、静宁颗粒复方提取物在大鼠肠道中的吸收情况,分析出静宁颗粒中吸收入肠的主要成分及其来源。3采用经典摇瓶法测定四种木脂素在水和pH为1.0、2.0、2.5、5.0、5.8、6.5、7.8、9.0的磷酸盐缓冲液中的油水分配系数;在甲醇、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水和不同pH缓冲液中的平衡溶解度。4建立循环肠灌流模型考察不同浓度的静宁颗粒提取物在大鼠小肠的吸收情况,计算四种木脂素的吸收速率常数(Ka)、吸收半衰期(T1/2)、单位时间吸收率(P)、表观渗透系数(Papp)四种参数。5建立单向肠灌流模型考察静宁颗粒中四种木脂素在大鼠十二指肠、空肠、回肠的吸收情况;灌流液在不同浓度时在各个肠段的吸收情况;不同pH的灌流液在小肠的吸收情况;以四种木脂素为指标,考察了水提药物、远志及石菖蒲挥发油分别与五味子配伍后对五味子吸收的影响,从而有助于明确四种木脂素类成分的肠吸收机制,探讨影响其肠吸收的相关因素,并为静宁颗粒复方的合理配伍提供依据。结果1建立了同时测定静宁复方中毛蕊花糖苷、细叶远志皂苷、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素的体外HPLC含量测定方法。六种成分保留时间分别为6.651、22.754、39.057、44.175、67.763、74.690 min;加样回收率均在 95%~105%;精密度、重复性、稳定性的RSD<3%。工艺一~工艺五的含量经加权后分别为0.0989、0.0715、0.0756、0.1102、0.2049 mg/g。2在HPLC-DAD检测器下发现静宁颗粒吸收入肠成分大多来源于五味子饮片,经标准品比对发现主要为木脂素类成分。3五味子醇甲在水中及pH为1.0、2.0、2.5、5.0、5.8、6.5、7.8、9.0时的油水分配系数分别为 2.19、2.22、2.34、2.72、2.35、2.29、2.30、2.33、2.26。五味子醇乙分别为 3.30、3.01、3.16、3.17、3.11、3.03、3.12、3.13、3.08。五味子甲素分别为 2.26、2.06、1.95、1.88、2.24、2.32、1.68、2.06、2.53。五味子乙素分别为 2.05、2.31、2.01、2.37、2.01、2.42、2.31、2.22、2.48。4不同浓度的静宁颗粒在大鼠小肠中进行循环灌流后,四种木脂素的Ka值均无显著性差异,且吸收量与浓度不成正比。5由单向肠灌流可知质量浓度为0.64、1.28、2.56 mg/mL的静宁颗粒在各个肠段的吸收均为低浓度>中浓度≥高浓度,存在高浓度饱和现象;四种木脂素均在回肠吸收最好,其次为十二指肠,最后为空肠;不同pH下肠吸收情况比较发现最佳pH约为6.5;配伍前后Papp值比较结果为:五味子与远志配伍前后五味子醇甲增加2.5倍,五味子醇乙为2.5倍,五味子甲素为3.8倍,五味子乙素为2.8倍,吸收具有显著性差异(P<0.05);五味子与石菖蒲挥发油配伍前后五味子醇甲增加3.0倍,五味子醇乙为1.9倍,五味子甲素为3.4倍,五味子乙素为2.4倍,吸收具有显著性差异(P<0.05);五味子与其余水提药物配伍前后,四种成分吸收均无显著性差异(P>0.05)。结论1优选的最佳工艺:五味子、远志加10倍量60%乙醇,加热回流3次,每次2小时,合并煎液,滤过,干燥;石菖蒲加8倍量水,水蒸气蒸馏法提取挥发油,时间为8 h,所得挥发油用环糊精包合(包合工艺为:油:β-CD比例1:8,40℃,搅拌2小时),所得水液与水提部分合并,滤过,醇沉;太子参、熟地、枸杞、茯苓加12倍量水,回流提取3次,每次1.5小时,所得药液与石菖蒲水液合并,滤过,滤液浓缩成相对密度为1.10~1.15(60℃)的稠膏,加乙醇至含醇量为60%,冷藏静置24小时,过滤,浓缩,减压干燥。2经外翻肠囊法发现,静宁颗粒中四种木脂素类成分是主要吸收入肠成分。3本文所建立的检测肠灌流液中四种木脂素的HPLC检测方法稳定可行。4由循环肠灌流结果可知吸收量与浓度不成正比,与Ficks不一致,这表明在所研究的浓度范围以内,静宁颗粒中四种木脂素不仅仅是单纯的被动扩散,也许同时有载体媒介转运方式。5用单向肠灌流模型考察静宁颗粒在质量浓度为0.64、1.28、2.56mg/mL的肠吸收实验结果表明四种木脂素在所考察的溶度范围内肠吸收存在浓度饱和现象,提示五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素在肠的转运过程中除了被动扩散外,也许同时存在主动转运或促进扩散。6由单向肠灌流不同肠段吸收实验结果表明,四种木脂素在回肠的吸收显著高于在十二指肠、空肠的吸收,但在三个肠段均有吸收。说明静宁颗粒中四种木脂素在肠道中的吸收窗较长,但是以回肠部位的吸收最好。7由单向肠灌流不同配伍组肠吸收实验结果表明,远志中某些成分能明显促进五味子四种木脂素成分的肠吸收,其次为石菖蒲挥发油。