[目的]对脑忆源片进行药效学实验研究,评价其改善记忆力和缓解体力疲劳的药效；对改善学习记忆作用的体内物质基础进行研究；并对其中的指标性成分在体内的动力学进行初步研究,为后续研究脑忆源片在体内的吸收代谢及作用机理奠定基础。[方法]1脑忆源片的药效学研究1.1改善学习记忆的药效学研究将实验动物随机分成空白组、模型组、脑力宝组(中阳组)、吡拉西坦组(西阳组)、脑忆源片高、中、低剂量组七组,用跳台及水迷宫装置进行行为学观察,用HE染色脑组织并对病理切片进行海马椎体细胞和大脑皮质神经元细胞计数,并用流式细胞仪观测海马神经元细胞凋亡情况。1.2抗疲劳的药效学研究将实验动物随机分成空白组、花旗参组(中阳组)、ATP组(西阳组)、脑忆源片高、中、低剂量组六组,用爬杆及游泳装置进行抗疲劳实验行为学观察,用试剂盒对生化指标进行测定。2改善学习记忆的作用机理研究①采用HPLC-ECD法检测空白组和给药组大鼠脑组织中单胺类神经递质含量；色谱柱：Phenomenex luna C18 (150×4.60mm,5μm);流动相：200mmol·L-1磷酸二氢钠水溶液-乙腈(87：13)；流速：1 mL·min-1;柱温：35℃。②将脑组织匀浆后,按试剂盒说明进行操作,用酶标仪在要求的波长下测定脑中乙酰胆碱酯酶活性、过氧化脂质含量、超氧化岐化酶活性、Na+、K+-ATPase、游离钙离子浓度。3药动学初步研究采用HPLC法测定不同时间点淫羊藿苷的血药浓度,药-时曲线数据经DAS药动学计算程序处理；采用HPLC法检测不同时间点的肠内收集液中淫羊藿苷的含量及通过对分化出绒毛面的肠腔AP侧(apical)和基底面BL侧(basolateral)的药物转运测定,判断药物的吸收机制；数据用SPSS软件进行处理分析。色谱柱：Phenomenex luna C18 (150×4.60mm,5μm)；流动相：乙腈-水(30：70)；流速：1 mL·min-1;检测波长：270nm。[结果]1脑忆源片的药效学研究1.1改善学习记忆的药效学研究①跳台实验：第1天测试时各实验组错误次数相差不大,24h测试时,各实验组的错误次数都呈现逐渐减少的趋势,但模型组错误次数均最高,空白组错误次数均最少,第5天测试时除模型组外,其余各组与空白组相差均不大,各组的潜伏期都在呈现逐渐延长的趋势。②水迷宫实验：第1天各组都不知道平台在哪儿,都处于学习阶段,潜伏时间相差不大,从第2天起,各组大鼠的逃避潜伏期开始拉开距离,之后的几天模型组的潜伏期始终高于空白组,随着测试天数的增加,各组的潜伏期均在减少。③与空白组相比,模型组5个视野的海马椎体细胞总数及大脑皮质神经元细胞总数计数均明显减少。④与空白组比较,西阳组凋亡率下降,其余各组均上升；PI指数模型组最低,脑忆源片低剂量组与空白组及中药阳性组接近,西药阳性组的PI指数与脑忆源片中、高剂量组接近。与模型组对比,各实验组细胞凋亡率均无统计学差异；各实验组PI指数均增加(P<0.05)。1.2抗疲劳的药效学研究①脑忆源片各剂量组均可延长小鼠的爬杆时间(P>0.05)。②脑忆源片各剂量组均可延长小鼠的负重游泳时间(P<0.05)。③脑忆源片中、高剂量组肝糖原含量均比空白组低。④各给药组均能降低小鼠体内的血尿素氮含量(P<0.05)；各给药组均能降低小鼠体内的血乳酸升高幅度及增加血乳酸的降低幅度(P<0.05)。2改善学习记忆的作用机理研究①NE、E、DA、5-HIAA及5-HT五种物质在0.0095～10.5ng·μL-1之间线性关系均良好(r≥0.9996)；E的最低检测限低于5ng·mL-1, NE、DA、5-HIAA、5-HT的最低检测限均低于1.21ng·mL-1,五种物质平均回收率均在84.41%～100.92%之间。与空白组相比,高、中、低剂量组NE、E、DA含量均升高,5-HT含量均降低,且NE、DA及5-HT含量变化与剂量呈量效关系。②与模型组相比,脑忆源片高、低剂量组能使SOD值含量增高,高剂量组与空白组接近；脑忆源片各剂量组Ca2+浓度均降低(P<0.01)；脑忆源片各剂量组MDA含量均降低(P<0.01)；各剂量组Na+、K+-ATPase活性均明显增加(P<0.01)；脑忆源片各剂量组乙酰胆碱酯酶的活性均降低(P<0.01)。3药动学初步研究①主要动力学参数：t1/2α(1.554) h；t1/2β(1.692) h；ka(0.463) h-1；Tmax(3) h; Cmax(3.923875)mg·L-1；AUC0～1(25.877)mg·(h·L)-1；AUC0～∞(25.889)mg·(h·L)-1。②在十二指肠、空肠和回肠中淫羊藿苷单位时间吸收量分别为(0.1046±0.0191)、(0.1276±0.0323)、(0.1949±0.0895)μg·min-1,各肠段单位时间吸收量差别有统计学意义。③脑忆源片中的淫羊藿苷在Caco-2细胞中由AP-BL和BL-AP转运量随时间增长而增加,渗透系数随时间增长而有所降低,与淫羊藿苷单体具有相同趋势。[结论]1脑忆源片负重游泳试验阳性,降低游泳后血清尿素氮含量及抑制游泳后血乳酸升高幅度指标阳性,可初步判定脑忆源片具有显著的抗疲劳作用2从跳台和水迷宫的行为学来看,脑忆源片具有显著的提高学习记忆的作用。脑忆源片在增加海马椎体细胞和皮质神经元细胞数目方面的作用与中药阳性对照组相当。脑忆源片对细胞凋亡率的影响不明显,但各剂量组均能使PI指数增加,连续给药30天后,高剂量组能使模型动物的PI指数调整到与空白组相当的水平。3脑忆源片改善学习记忆的作用可能与其改变脑内单胺类递质的含量变化有关。提高SOD活性及Na+、K+-ATPase活性、降低TChE与Ca2+浓度可能是脑忆源片发挥改善学习记忆药效的另一途径。4大鼠灌胃脑忆源片后,淫羊藿苷的药-时曲线符合二室模型,4h左右达到血药浓度峰值。在本试验持续的140 min内,淫羊藿苷在不同部位的吸收趋势为回肠>空肠>十二指肠。脑忆源片可显著提高淫羊藿苷的转运,同时可降低淫羊藿苷的外排作用,提示可能同时存在主动转运与载体外排机制。