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目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为特征的慢性全身自身免疫性疾病。趋化因子产生的炎症反应与自身免疫性抗体的产生在疾病的发生和发展过程中共同起作用。对趋化因子和自身免疫性抗体的研究有助于阐明RA的发病机制,并将可能成为RA的诊断、治疗和判断预后的有效指标。本文的目的在于利用实时荧光定量PCR技术研究CC族趋化因子巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1 alpha,MIP-1α)在RA患者血液、关节液的mRNA表达水平,以及MIP-1α、抗环瓜氨酸抗体(anticyclic citrullinated peptide antibody,anti-CCP antibody)在血清、关节液中的浓度,进一步探讨MIP-1α与抗CCP抗体关系,观察他它们在RA发病机制中可能起的作用,为RA的早期诊断、治疗提供科学依据。
方法:RA组:共收集18例外周血标本,11例关节液标本,其中10例两者均采集。骨关节炎(osteoarthritis,OA)组:共收集6例外周血标本,2例关节液标本。正常对照组:共收集15例外周血标本。以上关节液标本均来自膝关节液。用实时荧光定量PCR技术检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和关节液单个核细胞(synovial fluid mononuclear cell,SFMC)中MIP-1α mRNA表达水平。同时对血清和关节液采用ELISA法测定MIP-1α和抗CCP抗体的浓度。
对实验结果采用SPSS13.0进行统计分析,变量间相关性采用spearman相关性分析。P<0.05为有显著性差异。
结果:
1.RA组MIP-αamRNA的表达。
RA组外周血GAPDH与MIP-1α Ct值的比值为0.6022±0.0279;关节液GAPDH与MIP-1α Ct值得比值为0.6934±0.0544,两组相比有统计学差异(p<0.01)。
2.MIP-1α在血清和关节液中的含量。
2.1 RA组血清中MIP-1α的浓度为199.798±55.612pg/mlOA组的浓度为1 16.357±18.471pg/ml,正常对照组的浓度为33.621±12.439pg/ml,RA组与OA组相比、RA组与正常相比、OA组与正常相比均有统计学差异(p<0.01)。
2.2 RA 组关节液中 MIP-1α 的浓度为449.927±82.236pg/ml,OA组的浓度为170.527±27.41 7pg/ml,两者相比有统计学差异(p<0.05)。
2.3 RA组血清、关节液中MIP-1α的浓度分别为199.798±55.612pg/ml,449.927±82.236pg/ml,两者相比有统计学意义(p<0.01)。
3.RA组血清、关节液中抗CCP抗体的浓度分别为:122.479±85.524RU/ml:104.977±90.479RU/ml,两者相比无统计学差异(p>0.05)。
4.MIP-1α与抗CCP抗体的相关性。
4.1 RA组血清中两者无明显相关性(p>0.05)。
4.2 RA组关节液中两者相比无明显相关性(p>0.05)。
结论:
1.MIP-1α在RA患者中的表达高于OA组和正常对照组,并且RA患者关节液中表达远高于外周血中表达,提示MIP-1α参与炎症反应,招募外周血中的单核细胞进入关节炎症部位,进而在关节液中分泌更多的MIP-1α,形成血管翳,最终导致关节骨与软骨结构破坏,MIP-1α在RA发病机制中起着重要作用。
2.RA患者血清和关节液中均含有抗CCP抗体,提示RA患者血清与关节液中均含有分泌抗CCP抗体的B细胞。
3.RA患者抗CCP抗体与MIP-1α的浓度无明显相关性。说明抗CCP抗体含量的多少并不影响MIP-1α的分泌,两者相互之间无协调刺激作用。