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目的:通过检测糖尿病发病过程中Nampt,NF-κBp65,Sirt1基因表达变化,探讨Nampt对NF-κBp65和Sirt1基因的调控作用,为揭示糖尿病肾病的发病机理和新的治疗方法提供理论依据。方法:1.应用高浓度葡萄糖(35mmol/L)1640培养基培养NRK-52E细胞,在不同培养时间(0h,24h,48h,72h,96h,120h)提取各组蛋白,用蛋白质印记技术检测细胞内Nampt,NF-κBp65,Sirt1基因的蛋白表达情况;在培养过程中,观察细胞的形态学变化,同时免疫荧光技术检测细胞中Nampt,NF-κBp65和Sirt1基因的表达情况。2.通过2型糖尿病SD大鼠模型研究,应用免疫组化方法检测胰腺和肾脏中Nampt,NF-κBp65和Sirt1的蛋白表达,综合评价Nampt与NF-κBp65和Sirt1基因表达的关系,分析其在糖尿病及糖尿病肾病发病之间的作用及其相互关系。结果:1.NRK-52E细胞在高浓度葡萄糖环境中,Nampt随着培养时间延长,表达量明显升高,此时NF-κBp65表达也随之增加,而Sirt1的蛋白表达水平则随着Nampt表达的增加而逐渐降低;形态学观察发现,与对照组比较,高浓度葡萄糖培养的NRK-52E细胞,细胞核体积明显变大,细胞呈现出不规则的变化;荧光显微镜下发现,Nampt在细胞内表达明显增加,且胞浆和胞核中均见有表达,NF-κBp65蛋白表达也明显增强,此时Sirt1表达则低于正常糖浓度组;NF-κBp65表达随着Nampt蛋白的增加而增加,而Sirt1表达随着Nampt蛋白的增加而降低;2.在2型糖尿病模型大鼠的胰腺组织中,在胰岛中Nampt、NF-κBp65和Sirt1均见有表达,模型组中Nampt和NF-κBp65表达明显高于正常对照组,而Sirt1的表达低于正常对照组;在肾脏组织中,Nampt,NF-κBp65和Sirt1蛋白主要表达于肾小管和肾小球部位部分有表达,其中Nampt和NF-κBp65明显高于对照组,而Sirt1蛋白表达则低于对照组。结论:1.在高糖浓度培养的NRK-52E细胞中Nampt、NF-κBp65增加,而Sirt1表达则明显降低;2.在2型糖尿病模型SD大鼠胰腺和肾脏组织中,Nampt,Nampt和NF-κBp65表达增加,Sirt1蛋白表达减少。在糖尿病及糖尿病肾病的发病中,Nampt可能作为关键因子在调节NF-κBp65和Sirt1蛋白表达方面发挥中作用。