【摘 要】
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本论文以粉葛植株作为试验材料,研究腋芽再生途径、器官发生途径和体细胞胚再生途径粉葛组培苗再生体系的建立,通过比较这三条再生途径中粉葛组培苗再生的效率及难易程度,明确适合构建粉葛离体快繁体系的再生途径。同时,在此基础上,也系统研究了三条再生途径诱导粉葛组培苗的主要影响因素,主要研究结果如下:1、腋芽再生途径研究。以粉葛幼嫩枝条作为外植体,研究灭菌剂及表面活性剂对粉葛灭菌效果的影响;以粉葛幼嫩茎段作为
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本论文以粉葛植株作为试验材料,研究腋芽再生途径、器官发生途径和体细胞胚再生途径粉葛组培苗再生体系的建立,通过比较这三条再生途径中粉葛组培苗再生的效率及难易程度,明确适合构建粉葛离体快繁体系的再生途径。同时,在此基础上,也系统研究了三条再生途径诱导粉葛组培苗的主要影响因素,主要研究结果如下:1、腋芽再生途径研究。以粉葛幼嫩枝条作为外植体,研究灭菌剂及表面活性剂对粉葛灭菌效果的影响;以粉葛幼嫩茎段作为试验材料,研究了不同的外植体部位、基本培养基、6-BA浓度、NAA浓度及配比对粉葛腋芽萌发的影响;以粉葛无菌组培苗为材料,研究基本培养基、细胞分裂素、生长素、有机添加物4个因素对粉葛丛生芽诱导的影响;以粉葛的腋芽或丛生芽为材料,研究了基本培养基和激素配比2个因素对继代培养的影响。结果表明:适合粉葛外植体灭菌方式为0.1%升汞+吐温-80;适合粉葛腋芽萌发的外植体为第2个带节茎段,适合粉葛腋芽萌发的培养基为MS+6-BA0.5 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1;对粉葛丛生芽诱导率的影响为细胞分裂素>生长素>基本培养基>有机添加物,其中,TDZ对丛生芽诱导具有显著性影响;适合粉葛丛生芽诱导的培养基为MS+TDZ1.5 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+CH200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1;适合粉葛组培苗继代的培养基为MS+IBA0.2 mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1+TDZ0.5mg·L-1+KT1.0 mg·L-1。2、器官发生途径研究。以粉葛植株作为试验材料,研究外植体部位、基本培养基、6-BA浓度、NAA浓度、光温条件5个因素对粉葛愈伤组织诱导的影响;以粉葛愈伤组织为材料,研究了TDZ浓度、NAA浓度、CH浓度3个因素对器官发生型不定芽诱导的影响。结果表明:适合粉葛外植体诱导愈伤组织的外植体部位为幼嫩的茎(包括有节茎段和无节茎段),适合粉葛外植体诱导愈伤组织的培养基为1/2MS+6-BA0.7 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+蔗糖15 g·L-1+琼脂7 g·L-1,光温条件前期(前14 d)为1000 Lx光照和25℃温度,后期(后14 d)为2500 Lx光照和25℃温度;诱导器官发生型不定芽的培养基为1/2MS+TDZ2.0 mg·L-1+NAA1.0 mg·L-1+CH50 mg·L-1+蔗糖15 g·L-1+琼脂7 g·L-1。3、体细胞胚再生途径研究。以粉葛愈伤组织为试验材料,研究基本培养基、接种量、蔗糖浓度、激素配比对悬浮培养细胞增殖倍数的影响;以悬浮培养得到的粉葛细胞团为试验材料,将细胞团接种到不定芽培养基中进行培养。结果表明:适合粉葛细胞悬浮培养的培养基为MS+2,4-D1.5 mg·L-1+NAA1.0 mg·L-1+KT0.2mg·L-1+蔗糖50 g·L-1,适合粉葛细胞悬浮培养的初始接种量为0.2 g;通过培养研究,本试验没有成功得到体细胞胚发生的再生植株。4、生根及炼苗研究。以粉葛组培苗为试验材料,研究基本培养基、有机添加物、激素配比及支持物对粉葛组培苗生根的影响;以粉葛组培生根苗为试验材料,研究不同基质对粉葛组培苗移栽的影响。结果表明:适合粉葛组培苗生根的培养基为1/2MS+NAA1.0 mg·L-1+IBA0.5 mg·L-1+6-BA0.5 mg·L-1+香蕉40 g·L-1,NAA对粉葛组培苗的生根具有极显著性的影响,适合粉葛组培苗生根的支持物为蛭石;适合粉葛组培苗移栽的基质为:腐殖土:蛭石:有机肥=2:1:1。
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