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高血压是临床常见的慢性心血管疾病,发病较为隐匿,初期多无明显症状或症状较轻,但长期的高血压状态可导致血管结构和功能异常,引发心脏、肾脏、脑等脏器损害以及多种并发症,成为全球死亡相关的第一危险因素。高血压作为一种循环系统疾病首先威胁血管内皮细胞和血管的功能,血管内皮功能障碍和高血压的发生相互促进,形成恶性循环。内皮祖细胞是内皮的前体细胞,在一定条件下能增殖分化为血管内皮细胞,具有修复损伤内皮和改善内皮功能的作用,从而延缓高血压的发展进程。研究指出,雌激素水平下降可能通过影响血管功能、肾素-血管紧张素系统及交感神经系统等独立地诱发高血压的发生,成为女性更年期高血压病多发的重要原因。雌激素具有扩张血管、调节血脂、抗凝血、抗炎症以及改善内皮祖细胞功能等心血管保护作用,但雌激素替代疗法在禁忌症、不良反应、给药剂型及时机等方面存在较大争议。淫羊藿苷是中药淫羊藿的主要成分,属于植物雌激素,对内皮祖细胞及血管内皮细胞具有保护性作用。为了探索淫羊藿苷能否通过类雌激素作用来保护内皮祖细胞并降低去势雌性高血压大鼠的血压水平,为补肾法在更年期高血压的应用提供理论基础,我们进行了以下研究:首先进行了二仙汤对更年期高血压的网络药理学研究,其次通过网络药理学和分子对接的方法继续探索了淫羊藿对更年期高血压的影响及机制,再次通过体内实验进一步研究淫羊藿苷对去势雌性高血压大鼠血压及内皮祖细胞的影响及其机制,最后通过体外实验探究淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ诱导的内皮祖细胞损伤的影响及其机制。研究一二仙汤治疗更年期高血压的网络药理学研究目的:采用网络药理学的方法探索二仙汤治疗更年期高血压的作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）筛选二仙汤中药物的主要有效成分及作用靶点,通过Uniprot数据库将靶点名称校正为标准的基因名称。通过人类基因数据库（GeneCards）和 Online Mendelian Inheritance in Man（OMIM）数据库检索更年期高血压的疾病靶点,利用韦恩图获得更年期高血压与二仙汤靶点的交集靶点,运用Cytoscape软件构建“药物-有效成分-交集靶点网络”图,采用STRING数据库构建蛋白质相互作用（protein-protein interactions,PPI）网络,并进行聚类分析。运用DAVID数据库进行基因本体（Gene ontology,GO）分析和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路富集分析,并绘图。通过 Cytoscape3.7.1软件构建“药物-成分-靶点-通路”网络。结果:得到二仙汤中有效成分共92个,作用靶点共218个,更年期高血压疾病靶点1 189个,取交集后获得127个靶点。通过“药物-有效成分-交集靶点”网络发现,二仙汤治疗更年期高血压可能与槲皮素、木犀草素、山奈酚等有效成分有关。根据GO和KEGG富集分析,二仙汤治疗更年期高血压涉及的主要生物过程有细胞凋亡、细胞增殖及细菌反应等,主要通路包括Toll样受体信号通路、TNF信号通路及PI3K-Akt信号通路等。结论:二仙汤可能主要通过槲皮素、木犀草素、山奈酚等有效成分和Toll样受体信号通路、TNF信号通路、PI3K-Akt信号通路等发挥调节内皮功能、抑制平滑肌增殖、抗炎与抗氧化应激等作用,从而改善和治疗更年期高血压。研究二淫羊藿治疗更年期高血压的网络药理学研究目的:采用网络药理学和分子对接的方法探索淫羊藿治疗更年期高血压的作用机制。方法:利用TCMSP平台筛选淫羊藿的主要有效成分及作用靶点,通过Uniprot数据库将靶点名称校正为标准的基因名称。通过GeneCards和OMIM数据库检索更年期高血压的疾病靶点,利用韦恩图获取更年期高血压与淫羊藿靶点的交集靶点,运用Cytoscape软件构建“淫羊蕾-有效成分-交集靶点网络”图,采用STRING数据库构建PPI网络,再进行模块化分析。运用DAVID数据库进行GO分析和KEGG富集分析,并作图。通过Cytoscape3.7.1软件构建“淫羊藿-成分-靶点-通路”网络,通过Autodock vina软件对网络中degree值较高的靶点和有效成分进行分子对接验证。结果:淫羊藿的有效成分共23个,其作用靶点共199个,与更年期高血压靶点取交集后获得118个靶点。通过“药物-有效成分-交集靶点”网络发现,淫羊藿治疗更年期高血压可能与槲皮素、木犀草素、山奈酚等有效成分有关。根据GO和KEGG富集分析,淫羊藿治疗更年期高血压涉及的主要生物过程有细胞凋亡、细胞增殖和细菌反应等,主要通路包括Toll样受体信号通路、TNF信号通路及PI3K-Akt信号通路等。分子对接显示靶点PTGS2、PTGS1、MAPK1、AKT1、AR、RELA与槲皮素、木犀草素及山奈酚等有效成分之间具有较高的结合活性。结论:淫羊藿可能主要通过槲皮素、木犀草素、山奈酚等有效成分和Toll样受体信号通路、TNF信号通路、PI3K-Akt信号通路等以及PTGS2、MAPK1、AR等靶点来发挥调节内皮功能、抑制平滑肌增殖、抗炎与抗氧化应激等作用,从而预防和改善更年期高血压。研究三淫羊藿苷对去势雌性高血压大鼠及内皮祖细胞的类雌激素作用研究目的:探索淫羊藿苷对去势雌性高血压大鼠体重、血压、心率及内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）功能的影响。方法:9周龄WKY去势雌性大鼠10只,9周龄SHR去势雌性大鼠50只,以WKY大鼠为空白组（WKY）,SHR组大鼠随机分为模型组（SHR）、雌激素组（0.1 mg/kg,SHR-E2）、淫羊藿苷低剂量组（20 mg/kg,SHR-1）、淫羊蕾苷高剂量组（40 mg/kg,SHR-H1）、淫羊藿苷低剂量+雌激素受体阻断剂组（52 mg/kg/month,SHR-1+ICI）。大鼠行卵巢切除术后观察一周,无感染后再分别给予相应药物干预8周。自给药之日起每周检测各组大鼠体重,检测给药前及给药8周后各组大鼠的平均动脉压及心率,并于给药8周后腹主动脉取血提取外周血EPCs,处死大鼠后取其后肢提取骨髓EPCs。体外鉴定并培养EPCs,进行EPCs的活性及一氧化氮（Nitric oxide,NO）的水平检测。结果:（1）给药前,各组大鼠体重无差异。给药后,与SHR组比较,SHR-E2组大鼠体重明显下降,其他组无明显差异。（2）给药前,其他各组较WKY组的平均动脉压明显升高,SHR各组间的平均动脉压无差异。与给药前相比,给药8周后,各组的平均动脉压均显著升高。给药8周后,与WKY组相比,SHR组平均动脉压显著升高,与SHR组相比,SHR-E2组、SHR-1及SHR-H1组的平均动脉压水平明显下降;与SHR-1组比较,SHR-1+ICI组平均动脉压明显升高。（3）给药前,各组的心率无明显差异。与给药前相比,给药8周后各组心率明显升高。给药8周后,与SHR组相比,SHR-1和SHR-H1组心率明显下降,SHR-E2组的心率无显著差异;与SHR-1组比较,SHR-1+ICI组的心率明显升高。（4）给药8周后,与WKY组相比,SHR组中骨髓和外周血的EPCs活性及NO分泌明显下降;与SHR组相比,SHR-E2组、SHR-1和SHR-H1组的EPCs活性及NO水平均明显升高;与SHR-1组比较,SHR-1+ICI组的EPCs活性及NO分泌明显下降。结论:淫羊藿苷能降低去势雌性高血压大鼠的血压和心率,并提高外周血和骨髓来源EPCs的活性和NO分泌水平,可能与类雌激素样作用有关。研究四淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ诱导的骨髓内皮祖细胞损伤的类雌激素作用研究目的:研究淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,Ang-Ⅱ）诱导的大鼠骨髓EPCs损伤的类雌激素作用。方法:分离、培养并鉴定EPCs,以不加药物干预为空白组（control）,Ang-Ⅱ诱导的EPCs损伤为模型组（Ang-Ⅱ,10 μmol/L）,雌二醇（E2,0.01 μmol/L）、低中高不同浓度的淫羊藿苷（ICA-L、ICA-M、ICA-H,分别为 0.01 μmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L）及雌激素受体阻断剂组（ICA-H+ICI,1 μmol/L）为实验组。药物干预24h后,硝酸还原酶法检测细胞上清中NO水平,酶联免疫吸附法检测上清中内皮素-1（endothelin-1,ET-1）水平,蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测各组细胞中eNOS、P-eNOS和iNOS蛋白的表达情况。结果:（1）与control组相比,Ang-Ⅱ组中EPCs的细胞活力显著降低;与Ang-Ⅱ组比较,ICA-L、ICA-M和ICA-H组的细胞活力均明显增加。（2）与control组相比,Ang-Ⅱ组中NO的水平明显降低;与Ang-Ⅱ组相比,E2、ICA-L、ICA-M、ICA-H组中NO分泌水平均显著增加;与ICA-H组比较,ICA-H+ICI组的NO分泌水平明显增加。与control组相比,Ang-Ⅱ组中ET-1分泌能力显著增加;与Ang-Ⅱ组比较,E2和ICA-H组的ET-1分泌水平明显降低;与ICA-H组比较,ICA-H+ICI组中在ET-1水平明显增加。（3）Western-blot结果显示,与control组相比,Ang-Ⅱ组中iNOS蛋白的表达明显升高;与Ang-Ⅱ组比较,E2和ICA-M组的iNOS蛋白表达均显著降低,与ICA-H组相比,ICA-H+ICI组的iNOS蛋白表达明显下降。结果显示,各组间eNOS蛋白的表达无明显差异。与control组相比,Ang-Ⅱ组中P-eNOS蛋白的表达显著增加;与Ang-Ⅱ组比较,E2、ICA-L、ICA-M、ICA-H 组均降低了 P-eNOS 的表达;ICA-H+ICI 组促进了ICA对P-eNOS表达的抑制作用。结论:淫羊藿苷对Ang-Ⅱ诱导的EPCs损伤具有类雌激素样作用,能提高细胞活力和NO水平,并降低ET-1水平,同时下调iNOS蛋白和P-eNOS的表达。