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过度或持续性炎症反应会引发许多疾病,如何有效地控制及治疗炎症性疾病仍然是人们关注的研究热点。目前,二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid,DHA）和硒（Selenium,Se）各自抗炎作用及其机制的研究已取得显著进展,却仍缺乏它们间相互作用的研究。另外,由必需脂肪酸衍生的前列腺素、白细胞三烯和脂氧素等脂质介质参与调控炎症反应过程,研究炎症过程中多不饱和脂肪酸代谢机制及其代谢产物将有助于深入了解炎症调控机制和发现潜在炎症疾病治疗靶点。有研究表明,硒可能参与调控必需脂肪酸衍生的脂质介质的生成,其机制尚未明确。因此,本研究基于小鼠巨噬细胞RAW264.7,开展了以下试验,试验分为6组,各组RAW264.7细胞分别经 10 μg/mL DHA（D 组）、10 μg/mL DHA+0.05 μmol/L 亚硒酸钠（DS 组）、10 μg/mL DHA+1 μg/mLLPS（LD 组）、10 μg/mLDHA+1 μg/mLLPS+0.05 μmol/L 亚硒酸钠（LDS组）、1μg/mL PS（L 组）、0μg/mLDHA+0μg/mLLPS+0μmol/L 亚硒酸钠（Normal组）诱导24 h,分别按要求收集细胞和培养上清液,进行各项检测:1.探究硒对DHA调控LPS诱导的巨噬细胞中促炎（IL-1β、TNF-α和IL-6）和抗炎细胞因子（IL-10）表达的影响。采用半定量RT-PCR检测各组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10 mRNA表达情况,ELISA测定各组培养液上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10含量。结果显示,添加亚硒酸钠（0.05 μmol/L）不仅显著增强了 DHA（10 μg/mL）对 LPS（1 μg/mL）诱导 24 h 时 RAW264.7 细胞中促炎细胞因子 TNF-α mRNA（P<0.05）表达以及IL-1β（P<0.01）生成的抑制作用,还增强了 DHA促进抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达和蛋白生成（P<0.01）。由此提示,硒可增强DHA在LPS诱导巨噬细胞炎症反应中的抗炎作用。2.探究硒与DHA对LPS诱导的巨噬细胞中PUFAs衍生成脂质介质的关键酶5-LOX和COX-2 mRNA表达的影响。采用半定量RT-PCR检测各组细胞5-LOX和COX-2 mRNA表达情况。结果显示,DHA（10μg/mL）对LPS（1 μg/mL）诱导的巨噬细胞5-LOX mRNA表达影响不显著（P>0.05）,但表达呈现明显下降趋势,添加DHA（10μg/mL）和亚硒酸钠（0.05 μmol/L）共孵育显著下调了 5-LOX mRNA的表达（P<0.05）;此外,DHA（10μg/mL）或同时添加亚硒酸钠（0.05μmo1/L）与 DHA（10μg/mL）共孵育细胞均显著下调了 LPS（1μg/mL）诱导的COX-2mRNA表达（P<0.05）,LD组与LDS组间呈现明显下降趋势（P>0.05）。由此可见,DHA与硒联合能下调LPS诱导的巨噬细胞5-LOX和COX-2mRNA表达,并可进一步推测,硒可能增强DHA对LPS诱导巨噬细胞5-LOX和COX-2 mRNA表达的抑制作用。3.探究硒与DHA对LPS诱导的巨噬细胞脂质过氧化和酶途径脂质代谢的调控作用。测定各组细胞培养上清液中脂质过氧化物-丙二醛（MDA）的含量以反映脂质过氧化水平;应用LC-MS技术检测分析L组、LD组、LDS组和Normal组细胞脂质介质的生成情况,并进一步应用LC-MS/MS技术鉴定其中的同分异构体脂质介质。结果显示,DHA（10 μg/mL）能下调LPS（1μg/mL）诱导的巨噬细胞MDA（P<0.01）,能抑制LTC4向LTD4转化,还能上调具有抗炎作用的15d-PGJ2水平（P<0.05）,但对LA的过氧化产物9,10-EpOME的下调作用不显著（P>0.05）;亚硒酸钠（0.05 μmol/L）与DHA（10 μg/mL）联合则增强了对LPS诱导的巨噬细胞MDA（P<0.01）和9,10-EpOME（P<0.01）生成的下调作用,增强了对LTC4向LTD4转化的抑制作用以及对 15d-PGJ2 水平的上调作用（P<0.01）。此外,硒（0.05 μmol/L）和 DHA（10 μg/mL）共孵育细胞极显著上调了 LTD5（活性弱于LTD4）水平（P<0.01）,而下调了19,20-DiHDPA水平（P<0.01）。二级质谱检测鉴定了部分同分异构体脂质介质,包括:AA 衍生的 5-Oxo-ETE、5S-HETE、11,12-EET、12S-HETE、LTB4、LXA4和 PGE2;DHA 衍生的 Maresinsl、Maresins2、14S-HDHA、17S-HDHA、PD1、RvD1、RvD3、RvD4和RvD6;以及EPA衍生的RvE2和RvE3。结果表明,DHA下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的脂质过氧化水平,并且硒能明显增强DHA这种抗脂质过氧化作用。DHA能促进巨噬细胞生成15d-PGJ2而发挥细胞保护作用,而硒能增强DHA这种保护性作用。此外,DHA能抑制LPS诱导的巨噬细胞中LTC4向LTD4转化,硒与DHA联合时不仅增强了 DHA对此代谢过程的调控作用,还有利于LPS诱导的巨噬细胞合成更多的LTD5,并抑制了 19,20-EDP向19,20-DiHDPA转化的代谢过程,提示硒与DHA联合作用更有利于发挥抗炎作用。二级质谱鉴定结果也为进一步采用靶向脂质组学技术研究硒对促炎症消退脂质介质合成的调控奠定了基础。