【摘 要】
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[目的]本研究以Tau转基因小鼠作为研究对象,探讨大麻二酚（Cannabinoid,CBD）对Tau转基因小鼠行为学、病理学以及蛋白水平的表达变化影响,来探索CBD对AD样症状的治疗效果,主要集中于认知和病理的改善作用及其治疗机制,以期为临床发展CBD治疗阿尔茨海默（Alzheimer,AD）提供分子靶点,具有重要的科学意义和临床应用价值。[方法]将购买到的18只雄性同周龄Tau转基因小鼠随机均分
【基金项目】
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生物医药重大专项（2018ZF002）；
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[目的]本研究以Tau转基因小鼠作为研究对象,探讨大麻二酚（Cannabinoid,CBD）对Tau转基因小鼠行为学、病理学以及蛋白水平的表达变化影响,来探索CBD对AD样症状的治疗效果,主要集中于认知和病理的改善作用及其治疗机制,以期为临床发展CBD治疗阿尔茨海默（Alzheimer,AD）提供分子靶点,具有重要的科学意义和临床应用价值。[方法]将购买到的18只雄性同周龄Tau转基因小鼠随机均分为两组来构建模型:Contorl组为Tau转基因组（Contorl组）（采用0.1 ml/d/10g 0.9%氯化钠溶液腹腔注射模拟假手术）,CBD组为CBD治疗组（CBD组）（采用0.1 ml/d/10g 50 mg/kg·d CBD注射液腹腔注射）;19只同性别、同月龄C57BL/6小鼠分成两组:WT组作为正常对照组（WT组）（采用0.1 ml/d/10g 0.9%氯化钠溶液腹腔注射模拟假手术）,CBD+WT组为药物对照组（CBD+WT组）（采用0.1 ml/d/10g 50 mg/kg·d CBD注射液腹腔注射）。随后进行水迷宫实验对行为学进行检测,免疫荧光染色检测小鼠脑内NeuN、AT8以及Iba1表达水平,DAB染色检测ChAT表达水平,采用Western blot检测BACE1及PSD95蛋白表达水平。[结果]1.Morris水迷宫实验结果显示,在隐藏平台实验中,四组的组内逃避潜伏期日效应均显著（p<0.05）,四组间逃避潜伏期也存在差异（p<0.05）。在第3 d至第5 d,与WT组小鼠相比较,Con组小鼠的逃避潜伏期显著长于WT组小鼠（p<0.05）;而与Con组小鼠相比较CBD组小鼠的逃避潜伏期显著短于Con组小鼠（p<0.05）。在平台探索实验中,与WT组小鼠相比较,Con组小鼠穿过靶平台的频率及在靶象限的时间百分比均显著减少（p<0.05）;而与Con组小鼠相比较,CBD组小鼠穿过靶平台的频率和在靶象限的时间百分比均显著增加（p<0.05）。在旷场实验中,与WT组小鼠相比较,Con组小鼠在边角的探索时间均显著减少（p<0.05）;与Con小鼠相比较,CBD组小鼠在边角的探索时间均显著增加（p<0.05）。与WT组小鼠相比较,Con组小鼠在旷场探索的平均速度和探索行程均显著减少（p<0.05）;与Con组小鼠相比较,CBD组小鼠在旷场探索的平均速度和探索行程均显著增加（p<0.05）。2.实验采用免疫荧光染色对AT8标记点进行了染色来检测Tau蛋白的过度磷酸化。结果显示,与WT组小鼠相比较,Con组小鼠的AT8染色面积显著扩大（p<0.05）;与Con组小鼠相比较,CBD组的AT8染色面积显著减少（p<0.05）。使用Western blot检测BACE1的表达水平来判断CBD对Aβ的影响,结果显示,与WT组小鼠相比较,Con组小鼠的BACE1蛋白表达水平显著降低（p<0.05）;而与Con组相比较,CBD组小鼠的BACE1蛋白表达水平均明显上升（p<0.05）。3.为了探究CBD治疗后的转基因小鼠是否有效改善了细胞凋亡程度,使用了免疫荧光染色对神经元细胞Neun标记进行了染色。结果显示,与WT组小鼠相比较,Con组小鼠出现明显的Neun染色面积减少（p<0.05）;而与Con组小鼠相比较,CBD组小鼠的Neun染色面积更高且密集（p<0.05）。4.本实验采用对小胶质细胞标志物Iba1进行特异性结合染色来检测受到CBD治疗的Tau转基因小鼠脑内炎症情况。结果显示,与WT小鼠相比,Con组小鼠脑内小胶质细胞活化显著增多（p<0.05）;与Con组小鼠相比较,转基因型CBD治疗组小鼠小胶质细胞活化未有显著增多（p<0.05）。5.实验采用DAB染色来检测ChAT的表达情况（p<0.05）。与WT组小鼠相比,Con组小鼠脑病理切片CHAT的密度显著下降（p<0.05）;与Con组小鼠相比,CBD组小鼠脑内ChAT密度显著上升（p<0.05）。实验使用Western blot来检测突触相关蛋白PSD95的表达水平。结果显示,与WT组小鼠相比较,Con组小鼠的PSD95蛋白表达水平显著降低（p<0.05）;与Con组小鼠相比较,CBD组小鼠的PSD95蛋白表达水平均明显上升（p<0.05）。[结论]在本研究中,CBD减轻Tau转基因小鼠的学习、记忆及认知减退作用,减少Tau蛋白的产生及减轻海马神经元损伤程度,其机制可能与多个学说代表性因素相互作用介导有关。本研究结果从分子机制的角度探讨CBD对AD的治疗作用,将为临床发展CBD治疗AD提供分子靶标,具有重要的科学意义和临床应用价值。
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