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灵芝多糖是一种非常重要的活性多糖,具有抗氧化、提高机体免疫力、抑制肿瘤生长、降血糖、降血脂等多种药用活性和保健功能。本文以松杉灵芝[Ganoderma tsugae Murril]为研究对象,进行液体发酵培养基及发酵条件优化、菌丝体多糖提取条件优化,并对提取纯化的多糖进行体外抗氧化研究。主要研究结果如下:1、对松杉灵芝液体发酵培养基及培养条件进行研究,实验表明:玉米粉为最佳碳源,麦麸为最佳氮源,添加无机盐后更利于松杉灵芝菌丝体生长。正交实验结果:玉米粉5%、麦麸0.3%,KH2P04 0.05%,Mg SO4·7H2O 0.05%为最佳培养基配方。在最优条件下,摇瓶发酵松杉灵芝胞外多糖的得率为0.873 g·L-1,生物量为3.043 g·L-1。确定最佳培养条件:最佳初始p H 6,最佳装液量为250ml三角瓶中装液量80 ml,最佳发酵时间为6 d,最佳摇瓶转数为150 r·min-1,最佳接种量为10%,最佳接种龄为6 d。2、以菌丝体为材料,利用热水浸提法提取菌丝体多糖,以多糖得率为考察指标,进行提取温度、提取时间、料液比、提取次数四因素对松杉灵芝菌丝体多糖得率影响的单因素实验研究,在单因素实验的基础上进行四因素三水平L9(34)的正交实验,对实验结果进行极差分析。实验结果为:四因素对多糖得率影响的主次顺序为提取温度>料液比>提取时间>提取次数,菌丝体多糖的最佳提取工艺为提取温度100℃,提取时间2 h,料液比为1:30,提取1次即可。根据最优条件进行实验,测得菌丝体多糖的提取率为3.145%。3、分别采用Sevage法对松杉灵芝液体发酵胞外多糖进行脱蛋白处理,D101大孔树脂对多糖进行脱色,然后对多糖初步纯化品上Cellulose DE-52纤维素柱层析分离,分别用超纯水、0.1-1.0mol·L-1Na Cl进行梯度洗脱。共分出四个组分:GT-1、GT-2、GT-3、GT-4。对GT-1、GT-2进行红外光谱分析:组分GT-1具有多糖的特征吸收峰,是一种由α-D-吡喃葡萄糖组成的多糖;GT-2也具有多糖的特征吸收峰,能确定是多糖,但图不够清晰,不能判断糖苷键类型。4、对松杉灵芝多糖的初步纯化品进行还原力、清除DPPH·自由基、清除·OH自由基的能力、去除超氧阴离子能力进行研究,探讨其抗氧化性。实验结果为:松杉灵芝胞内和胞外多糖都具有一定的还原力,但还原能力较弱;松杉灵芝多糖可以清除部分DPPH·自由基,其清除能力随多糖浓度的增加而增大。在多糖浓度为10 mg·ml-1时,胞内多糖和胞外多糖对DPPH·自由基的清除率分别为52.07%、53.80%;当多糖浓度为1 mg·ml-1时,胞内多糖和胞外多糖对·OH自由基清除率分别为56.75%、61.40%;当多糖浓度为1 mg·ml-1时,胞内多糖和胞外多糖对超氧阴离子的清除率分别为71.69%、75.40%。以上四项指标都比阳性对照Vc低很多,表明松杉灵芝发酵多糖具有一定的抗氧化活性但不及Vc。