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1研究背景速灭威(m-tolyl methylcarbamate, MTMC)是一种常用的氨基甲酸酯类农药,可能通过多种接触途径产生神经毒性作用。高剂量急性接触的神经毒性早已被人们熟知,近期的研究提示低剂量慢性接触MTMC很可能增加认知和心理障碍,以及帕金森等其他神经退行性疾病的风险。但是至今尚不能确定MTMC是否具有神经发育毒性。2研究目的分别以小鼠N2a神经瘤细胞和大鼠C6胶质瘤细胞作为神经元和神经胶质前体细胞培养模型,以原代培养的小鼠胚胎神经干细胞为神经干细胞研究模型,比较速灭威对三种细胞增殖的影响及敏感性;在此基础上研究速灭威对小鼠神经干细胞迁移、分化的作用,以期探讨速灭威对神经发育关键环节的影响。3方法在体外建立小鼠N2a成神经瘤细胞,小鼠胚胎神经干细胞培养模型,用5、25、50、100mg/L速灭威对细胞进行染毒,大鼠C6胶质瘤细胞以5、25、100mg/L剂量速灭威染毒,同时设立培养基对照和溶剂对照,运用四噻氮唑盐(MTT)比色法检测不同作用时间点(12、24、36h)的细胞增殖,并比较其差异;运用免疫荧光细胞化学技术,观察1、5、25mg/L速灭威处理24h对小鼠胚胎神经干细胞迁移的影响及处理36h对其分化的影响。统计学处理:SPSS13.0 for windows软件包建立数据库并进行统计分析4结果MTT结果显示,速灭威对三种不同的细胞具有不同程度的增殖抑制作用,尤其是对神经干细胞更为明显:①处理12h,本实验剂量速灭威对N2a和C6细胞均无明显抑制;除5mg/L,其余剂量均明显抑制胚胎神经干细胞增殖(均P <0.05);②处理24h,100mg/L明显抑制N2a细胞增殖;除5mg/L,其余剂量均明显抑制C6细胞增殖(均P <0.05);本实验各剂量速灭威均明显抑制胚胎神经干细胞增殖(均P <0.05)。③处理36h,除5mg/L,其余剂量均明显抑制N2a细胞增殖(均P <0.05);本实验剂量速灭威对C6和小鼠胚胎神经干细胞均产生明显抑制(均P <0.05);④免疫荧光细胞化学结果显示,5,25mg/L速灭威未影响神经干细胞的迁移,100mg/L速灭威明显降低神经球Dm(最长迁移距离)/Db(迁移前球直径)值(P <0.05); 25mg/L速灭威明显降低TUJ(+)细胞百分率(P <0.05);1mg/L及以上剂量速灭威均明显降低GFAP(+)细胞百分率(均P <0.05)。5结论在本实验剂量范围内速灭威对三种不同细胞的增殖都有不同程度的抑制作用,其中胚胎神经干细胞对速灭威的增殖抑制作用最敏感,其次是C6胶质瘤细胞。速灭威能够抑制小鼠胚胎神经干细胞向神经元和神经胶质分化,尤其是在低剂量条件下明显抑制神经干细胞向神经胶质分化。这些结果提示,速灭威暴露可能通过影响细胞增殖和分化等关键环节而产生神经发育毒性。