通城虎根等天然植物提取物的抑菌活性及机理研究

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从天然植物中开发安全、高效的防腐剂是目前防腐领域研究的热点。本文挑选丹参、金盏菊、紫草、黑种草籽、干姜、通城虎根、蒲公英等十余种价格低廉、易获得的植物原料,采用乙醇提取和水蒸气蒸馏得到植物醇提物和挥发油,检测其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性,以抑菌圈直径大小为指标。筛选确定通城虎根提取物抑菌能力最强、且文献研究相对较少,可作为研究对象。本文对通城虎根醇提物、石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相及其挥发油的成分分析和抑菌活性等方面进行研究,主要研究结果如下:(1)通过GC-MS对通城虎根醇提物、石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和挥发油的成分进行分析鉴定。结果为,不同溶剂相均含有脱氢香橙烯、香树烯、穿心莲内酯、马兜铃酮等成分。石油醚相马兜铃酮含量最高,达到45.07%,其次是乙酸乙酯相(36.16%)、醇提物(28.86%)、挥发油(21.68%)、正丁醇相(18.81%),发现马兜铃酮作为通城虎根提取物主要成分的实验结果未见报道。(2)通城虎根不同溶剂相的总黄酮含量明显多于总酚含量,且对DPPH自由基和ABTS自由基都有一定的清除效果。对大肠杆菌的抑菌作用排序:马兜铃酮>通城虎根乙酸乙酯相>醇提物≈正丁醇相>石油醚相;对金黄色葡萄球菌的抑菌作用排序:马兜铃酮>通城虎根乙酸乙酯相>醇提物≈石油醚相≈正丁醇相,且通城虎根不同溶剂相和马兜铃酮对金黄色葡萄球菌的抑制效果均好于大肠杆菌。课题研究发现马兜铃酮和通城虎根乙酸乙酯相对金黄色葡萄球菌抑菌效果达到极敏,抑菌效果几乎与阳性对照硫酸链霉素相当。(3)马兜铃酮和通城虎根乙酸乙酯相对金黄色葡萄球菌有极敏的抑菌效果,且对金葡的抑菌作用和机理相关文献研究并不多,进一步的抑菌机理显示,细菌生长曲线结果表明乙酸乙酯相和马兜铃酮通过延长了金葡菌对数生长期,使金葡生长减慢,从而控制金葡数目的增长。由结晶紫染色考察细菌生物膜形成,乙酸乙酯相和马兜铃酮可抑制细菌生物膜的形成,减弱金葡菌对外界不利因素的抵抗性,可能导致金葡菌死亡。在菌悬液中添加高低不同浓度的乙酸乙酯相和马兜铃酮,金葡菌细胞膜的饱和与不饱和脂肪酸含量发生变化,在高浓度样品作用下,细胞膜的饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸的比例更低,细胞膜流动性越大。同时,通城虎根乙酸乙酯相可使膜蛋白上的Phe、Trp和Tyr残基暴露到膜外,马兜铃酮主要使Phe和Trp残基暴露到膜外,使细胞膜蛋白构象相应发生变化,可能导致细胞膜功能障碍和细胞损伤。细胞受损后,菌体细胞膜完整性遭到破坏,细胞内容物释放,钾离子泄漏,电导率发生变化,蛋白质也随之泄露出来,细菌最终死亡。扫描电镜结果也直观地说明通城虎根乙酸乙酯相破坏金葡菌形态,细菌表面破裂、凹陷,失去了原有的正常细胞形态。(4)利用抑菌效果最好的通城虎根乙酸乙酯相与丹参、金盏菊不同溶剂相复配,对大肠杆菌和金葡菌进行抑菌实验。结果显示,通城虎根乙酸乙酯相与丹参石油醚相复配后提高了通城虎根乙酸乙酯相对金葡的抑菌效果,达到极敏;其余复配物对金葡菌和大肠杆菌的抑菌效果属于中敏和高敏水平。
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