发光微生物传感器的构建及其在遗传毒性检测中的应用

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环境中的部分化学物品对生物遗传物质的影响,已经成为最受人关注的环境问题之一。传统的理化监测,无论在成本上还是效率上,已经不能满足监测的需要。更重要的是,理化分析只能对某种化学物品进行准确定量,却不能反映其对生物体的效应。针对传统急性毒性检测方法的不足,目前国内外研究者建立了多种生物实验方法。生物传感器以其具有特异性好、灵敏度高、经济和简便、分析速度快、能在复杂体系中在线连续监测化合物毒性等优越的特性使得其在环境监测中的应用有着诱人的前景,其中发光微生物传感器以其检测时间短,灵敏度高的优势已经被广泛应用在毒性的检测上。因此,本文以重组TA1535-14为感应元件,构建了以Y型石英光纤作为传导光纤,荧光检测器检测光信号的微生物传感器。并用构建的微生物传感器对遗传毒性的阳性物质MMC、苯酚、H202和4-NQO进行了检测。(1)以重组沙门氏菌TA1535-Pcda:GFP为材料,将多管甘油管菌种分别用LB和LB+Amp培养基逐一进行活化并对存活的菌株进行筛选分离纯化、功能验证后,确定重组TA1535-14为构建微生物传感器的感应元件。实验确定了此菌的包埋释放条件为:5%海藻酸钠(SA)作为包埋剂,5%的CaCl2溶液为固定剂,VSA:V菌为1:5较佳。对菌的特性进行研究,最佳条件为温度30℃,起始接种浓度(OD600)为0.8。(2)通过传导性能试验对比后,选择Y型石英光纤作为传导光纤,荧光检测器检测光信号构建传感器,用此传感器对遗传毒性检测的阳性物质如:丝裂霉素C(MMC)、苯酚、过氧化氢(H202)和4-硝基喹啉-N-氧化物(4-NQO)进行了检测,试验结果表明:MMC最低检测浓度分别为0.01μg/mL,线性范围在1×10-2~6×10-2μg/mL之间;苯酚最低检测浓度为2×102μg/mL,线性范围在2×102~2.6×102μg/mL之间;H202最低检测浓度为10μmol/L,在10~18μmol/L间有良好的线性;4-NQO最低检测浓度为0.101μg/mL,线性范围在0.10-0.801μg/mL。总体来说,构建的微生物传感器具有对遗传毒性物质的检测效果好、灵敏度高、经济、快捷,操作简便等特点。为发光微生物传感器在遗传毒性物质的快速检测中的应用及环境监测中的应用,提供了重要依据,对环境污染物的快速检测具有重要的现实意义。
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