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目的:卵巢癌是妇科死亡率最高的恶性肿瘤,其发病隐匿,进展迅速,70%～80%的卵巢癌病人发现时已为晚期,其5年生存率仅为20%～30%,主要原因是早期卵巢癌没有症状,病人难以及时就诊。因此上皮性卵巢癌的早期诊断成为亟待解决的课题。本研究通过检测协同共刺激因子4 (B7-H4,又称B7s、B7x)在正常卵巢、上皮性良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤、卵巢癌组织及血清中B7-H4、人附睾蛋白4 (human epididymis protein 4, HE4)的表达水平,探讨B7-H4、HE4与卵巢癌之间的相关性,并通过与CA125比较,探讨作为肿瘤标记物与CA125联合检测,用于卵巢癌早期诊断、监测疗效的价值。方法:1免疫组织化学法检测正常卵巢及上皮性卵巢肿瘤组织中B7-H4蛋白的表达水平,其中正常卵巢11例、良性卵巢肿瘤20例、交界性卵巢肿瘤10例、卵巢癌30例(浆液性囊腺癌25例,粘液性囊腺癌5例)。比较4种组织中B7-H4阳性表达情况,以及B7-H4在卵巢癌组织中的阳性表达率与不同临床病理特征之间的关系。2酶联免疫吸附(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)双抗体夹心法检测血清中B7-H4、HE4的浓度,其中健康妇女11例、良性卵巢肿瘤20例、交界性卵巢肿瘤7例、卵巢癌术前、术后各25例,血清CA125浓度由本院实验室采用电化学发光法常规测得。比较4组血清中B7-H4、HE4表达水平。分析卵巢癌病人术前血清B7-H4、HE4浓度值与与不同临床病理特征的关系。比较卵巢癌病人术前术后血清B7-H4、HE4表达水平的变化。分析卵巢癌病人术前血清B7-H4浓度值与组织中表达强度之间的相关性。3以健康妇女+良性肿瘤组作参考人群,制作ROC曲线获得界点值,计算血清B7-H4、HE4诊断卵巢癌的敏感度和特异度。比较B7-H4、HE4单独或联合CA125检测卵巢癌的价值。比较血清HE4在不同界值点时对上皮性卵巢癌的诊断能力。4应用SAS统计软件进行统计学分析,计量资料为偏态分布,用中位数表示,成组多样本比较采用Kruskal-wallis秩和检验,组间两两比较采用Bonferronit t检验,配对资料采用Wilcoxon符号秩和检验。计数资料采用χ2检验,不同组织学类型、临床分期、病理分级及阳性表达率的比较采用χ2检验和Fisher确切概率法。卵巢癌血清B7-H4浓度值与组织中B7-H4表达强度之间的相关性采用Spearman等级相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1 B7-H4在正常卵巢、上皮性良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤及卵巢癌组织中的表达B7-H4主要表达于卵巢上皮组织细胞的细胞浆、细胞膜,而细胞核不着色。B7-H4在4组中阳性表达率分别为9.1%(1/11)、20%(4/20)、30%(3/10)、83.3%(25/30)。卵巢癌组阳性表达率显著高于前三组,差异有统计学意义(P<0.0071),其余组间差异无统计学意义(P>0.0071)。2 B7-H4在卵巢癌组织中的表达与不同临床病理特征之间的关系B7-H4在卵巢浆液性囊腺癌中的阳性表达率为92%(23/25),明显高于黏液性囊腺癌40%(2/5),差异有统计学意义(P=0.0219<0.05);早期卵巢癌(Ⅰ/Ⅱ期)组织中阳性表达率57.1%(4/7),明显低于晚期卵巢癌(Ⅲ/Ⅳ期)组织中阳性表达率95.7%(22/23)(P=0.0307<0.05);高分化者阳性表达率为62.5%(5/8),明显低于中、低分化者阳性表达率95.5%(21/22) (P=0.0475<0.05)。3 B7-H4、HE4在健康妇女、上皮性良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤及卵巢癌病人血清中的表达水平B7-H4、HE4卵巢癌组表达水平均高于前三组,差异有统计学意义(均P<0.05),其余各组间表达水平无统计学差异(均P>0.05)。B7-H4、HE4术后3天表达水平较术前均显著降低,差异有统计学意义(P<0.0001)。4卵巢癌组B7-H4、HE4血清表达水平与临床病理特征之间的关系B7-H4与分期、分级、类型相关,差异有统计学意义(均P<0.05),与年龄、CA125不相关,差异无统计学意义(均P>0.05),卵巢癌组术前血清B7-H4浓度值与组织中B7-H4的表达强度成显著正相关关系(P<0.05);HE4表达水平与类型、年龄及CA125相关,差异有统计学意义(均P<0.05),而与分期、分级不相关,差异无统计学意义(均P>0.05)。5以健康妇女+良性肿瘤组作参考人群,B7-H4、HE4浓度分别在0.78ng/ml、107.15pmol/L时,(敏感性+特异性)-1的差值最大,即为最佳界值点。B7-H4检测卵巢癌的ROC-AUC为0.865,敏感度为84%,特异度为78.9%;HE4检测卵巢癌的ROC-AUC为0.960,敏感度为88%,特异度为92.1%。6 CA125的界点值为35KU/L、B7-H4的界点值为0.78ng/ml,HE4的界点值为107.15pmol/L(ROC曲线所得)或150pmol/L(试剂盒提供)时:B7-H4、HE4、CA125单独对卵巢癌检测的敏感度无差异(P>0.05);CA125与B7-H4联合检测、CA125与HE4联合检测,B7-H4、HE4、CA125三者联合检测敏感度均高于CA125单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。在5例早期(Ⅰ、Ⅱ期)卵巢癌的诊断中HE4的敏感度为100%,B7-H4为80%,CA125为60%。7当血清HE4界值点分别为107.15pmol/L、150pmol/L时,其敏感度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:1 B7-H4蛋白在卵巢癌组织中高表达,其表达水平与卵巢癌临床病理分期、分级、类型相关。血清B7-H4水平能代表组织中B7-H4表达情况,B7-H4蛋白可能参与了肿瘤的发生发展。2卵巢癌病人术前血清B7-H4、HE4水平升高,有望成为筛查卵巢癌的标记物。B7-H4血清表达水平与卵巢癌临床病理不良分期、分级、类型正相关,与年龄、CA125不相关。HE4表达水平与类型、年龄、CA125正相关,与分期、分级不相关。HE4、B7-H4可辅助CA125对卵巢癌的诊断。3 B7-H4、HE4、CA125对卵巢癌单项检测的敏感度无差异;CA125与B7-H4联合检测、CA125与HE4联合检测,B7-H4、HE4、CA125三者联合检测敏感度均高于CA125单独检测。B7-H4、HE4有望成为卵巢癌临床手术疗效判断及术后病情监测的新指标。4血清HE4水平以107.15 pmol/L为界值点,在提高卵巢癌诊断的敏感度和准确度、降低漏诊率上优于以150p mol/L为界值点,以150 pmol/L为界值点在降低误诊率上优于以107.15 pmol/L为界值点。