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研究目的:细胞周期调控紊乱是肿瘤细胞失控性增殖的生物学基础。CBX蛋白家族成员作为经典PRC1复合物的核心组分,在基因表观遗传调控中发挥着极其重要的作用。已有文献报道多种CBX蛋白参与肿瘤的发生发展,但CBX6在肿瘤发生发展中的作用及机制鲜有报道。本研究主要旨在细胞分子水平上探讨CBX6表达水平对乳腺癌细胞增殖的影响,并进一步探讨CBX6与乳腺癌细胞增殖调控之间的关系,并初步探讨CBX6调控细胞周期进程的分子机制。研究内容:检测CBX6在乳腺癌细胞系及乳腺正常上皮细胞中的表达水平;确定CBX6对乳腺癌细胞增殖的影响;流式细胞仪检测CBX6表达水平对乳腺癌细胞周期分布及凋亡的影响;初步探讨CBX6调控乳腺癌细胞周期进程的分子机制。研究方法:本研究首先通过Western Blot实验检测CBX6蛋白在乳腺癌细胞系及乳腺正常上皮细胞系中的表达水平;应用PCR实验扩增目的基因CBX6,通过和真核表达载体连接,即构建CBX6过表达质粒;应用平板克隆、MTT、EdU实验确定CBX6表达水平对乳腺癌细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测CBX6表达水平对乳腺癌细胞周期和凋亡的影响;应用细胞周期相关基因检测试剂盒检测CBX6基因与周期相关基因之间的关系;通过荧光素酶报告系统和RT-qPCR方法分别研究CBX6表达水平对miR-125a启动子活性的影响及CBX6表达水平对miR-125a-3p/5p表达的影响;通过生物信息学分析和RT-qPCR方法研究miR-125a-3p与长链非编码RNA ANRIL的关系。我们的研究首次探讨了 CBX6在乳腺癌增殖中所发挥的作用及相关分子机制,有望为乳腺癌的早期诊断和治疗提高有效的分子标志和靶点。研究结果:我们发现CBX6在乳腺癌细胞系中呈高表达,在乳腺正常上皮细胞系中呈低表达;沉默CBX6表达抑制乳腺癌细胞增殖,促进其凋亡并伴随细胞周期G1期阻滞和抑癌基因p15和p16表达上调;沉默CBX6能上调miR-125a-3p表达,过表达miR-125a-3p能下调长链非编码RNA ANRIL表达。研究结论:在乳腺癌中CBX6表达上调,募集PRC1于mir-125a启动子区,转录抑制miR-125a-3p表达,使其不能拮抗ANRIL,后者高表达导致p15和p16表达下调,促进乳腺癌细胞增殖。