目的:本实验拟通过饮食诱导联合药物的方法,建立痰瘀互结证代谢综合征(MS)大鼠疾病模型,采用方证互参、以方测证的方法,观察二陈汤合桃红四物汤干预后模型大鼠糖脂改善情况及血清代谢物组的变化,从而明确药物干预后“痰瘀互结证”代谢综合征代谢物水平的物质基础,并通过方剂的疗效评价佐证证候模型的可靠性,同时深入探讨中药的作用靶点,诠释复方中药药效的作用机理,为中药治疗病证结合模式下代谢综合征的作用机理提供科学的、客观的依据。材料与方法:1.痰瘀互结证代谢综合征大鼠模型制备40只健康雄性SPF级Wistar大鼠(动物合格证号:SCXK(辽)2010-0001),体重(220士20)g。在实验开始前,大鼠适应性饲养一周,自由饮食饮水,无不良反应、日常活动正常者纳入正式实验。先将大鼠按体重高低进行编号,然后运用随机数字表法将大鼠随机分成两组,即:正常组(n=10)、模型组(n=30)。两组大鼠均自由饮水,正常组基础饲料喂养,模型组高脂饲料喂养。12周后,模型组进行STZ腹腔注射,复制痰瘀互结证MS大鼠病证模型。合计16周。2.二陈汤合桃红四物汤干预将病证模型复制成功的24只大鼠采用随机数字表法按体重随机分为两组:模型组(n=12)、治疗组(n=12)以及正常组(n=10)。按照成年人每天中药的服用量等效换算成大鼠的剂量,折算后大鼠一日剂量为:0.4g/100g体重,予治疗组大鼠每100g体重1ml的用量日一次灌胃,予模型组及正常组大鼠相同的刺激,即:使用0.9%氯化钠注射液按照每100g体重1ml的用量日一次灌胃,连续8周。3.代谢组学研究运用GC-TOF/MS技术检测正常组、模型组、治疗组大鼠血清。首先将代谢物萃取及衍生化,然后进行上机检测。使用与Pegasus HT飞行时间质谱仪耦合的Agilent 7890气相色谱仪系统进行GC-TOFMS分析。首先,对原始数据进行预处理,以减少噪音数据的干扰;然后使用SIMCA软件对预处理后的数据进行主成分(PCA)分析、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),以最大程度的将预测主成分(Predictive component)凸显出来;最终筛选出差异化合物,并对差异化合物进行KEGG注释。从而辨识复方中药干预后痰瘀互结证MS潜在的生物标志物。结果:1.大鼠疾病模型的制备:从模型制备第4周开始,与正常组相比较,模型组大鼠体重增加明显,6周后出现大便异味加重,精神困倦,活动减少,毛色变暗,舌体出现瘀斑,舌质暗。空腹血糖在造模6周后与正常组大鼠相比,显著改变,两组之间差异存在统计学意义(P<0.05)。血脂含量在造模8周后与正常组大鼠相比,模型组大鼠均显著改变,两组之间存在统计学差异(P<0.05)。血液流变学指标在造模结束后与正常组比较,模型组大鼠同时出现血胰岛素升高、胰岛素抵抗等诊断指征,与本研究拟建立的痰瘀互结证代谢综合征的评估标准一致。2.中药干预结果:二陈汤合桃红四物汤干预8周后,可降低痰瘀互结证MS大鼠的空腹血糖、甘油三酯、血清胰岛素、全血黏度、血浆黏度、红细胞体积等水平,使高密度脂蛋白升高。中药干预后,可明显改善痰瘀互结证MS大鼠血糖、血脂、血液流变学及胰岛素抵抗情况。3.主要的潜在生物标记物:寻找到了L-苏氨酸、3-羟基丁酸、谷氨酰胺、2,3-二羟基吡啶、苯甲酸、木糖酸,1,4-内酯等多种代谢物,这些小分子物质参与体内糖类、脂类、蛋白质等物质的代谢,成为中药复方干预痰瘀互结证代谢综合征大鼠模型的特异性代谢组学特征。结论:1.通过饮食诱导(高脂饲料)联合药物(多次、小剂量STZ腹腔注射)的造模方法可成功复制出痰瘀互结证MS大鼠病证模型。2.二陈汤合桃红四物汤能明显改善痰瘀互结证代谢综合征大鼠模型的糖脂代谢情况,且具有时效关系,即:疗程越长,效果越好。3.运用代谢组学技术分析二陈汤合桃红四物汤干预后痰瘀互结证MS大鼠模型血清样本,找到了L-苏氨酸、3-羟基丁酸、谷氨酰胺、2,3-二羟基吡啶、苯甲酸、木糖酸,1,4-内酯等潜在的生物标志物,说明中药复方干预痰瘀互结证代谢综合征的作用机制与糖类、脂类、蛋白质等代谢有关,而这些小分子代谢物可能为中药作用的潜在靶点。