【摘 要】
：
第一部分COPD染色体不稳定与支气管上皮细胞有丝分裂调节功能异常的探讨目的:研究COPD支气管上皮细胞内染色体不稳定与有丝分裂功能异常的关系。探讨烟草致癌原NNK对支气管上皮的遗传毒性作用,并且对上皮细胞有丝分裂过程中关键调节基因表达水平变化的影响。方法:应用免疫荧光激光共聚焦技术对比COPD和正常支气管上皮细胞在烟草毒物NNK暴露后有丝分裂中心体和纺锤体的变化。应用RT-PCR方法筛选COPD支
【基金项目】
：
HHS/NIH/National Cancer Institute（NCI）（编号:CA216426）; 江苏省苏州市2019年度民生科技-医疗卫生应用基础研究项目（编号:SYSD2019045）; 江苏省卫生健康委2020年度医学科研立项项目（苏卫科教[2020]11号,编号241）
论文部分内容阅读
第一部分COPD染色体不稳定与支气管上皮细胞有丝分裂调节功能异常的探讨目的:研究COPD支气管上皮细胞内染色体不稳定与有丝分裂功能异常的关系。探讨烟草致癌原NNK对支气管上皮的遗传毒性作用,并且对上皮细胞有丝分裂过程中关键调节基因表达水平变化的影响。方法:应用免疫荧光激光共聚焦技术对比COPD和正常支气管上皮细胞在烟草毒物NNK暴露后有丝分裂中心体和纺锤体的变化。应用RT-PCR方法筛选COPD支气管上皮细胞有丝分裂相关基因的变化以及与肺癌的重叠基因,确定出现改变的基因位点,并应用Western-blot方法对筛选出的目标基因进行检测,同时动态观察目标基因在蛋白水平的表达和DNA损伤标志物的表达变化。最后应用通路分析IPA软件分析了 COPD有丝分裂调节关键基因与肺癌的相关性。结果:（1）烟草致癌原NNK的暴露会导致COPD支气管上皮细胞有丝分裂过程中纺锤体方向、中心体发生明显变化（P＜0.05）,与正常支气管上皮细胞相比,COPD细胞中的中心体扩增、染色体错位更显著（P＜0.05）。（2）有丝分裂调节关键因子PLK4、PLK1、Aurora A、Aurora B、CHK1 以及 DNA 损伤标志物γ-H2AX、XPC、Centrin-2在上皮细胞NNK暴露后的表达水平会出现动态变化,并且在COPD支气管上皮细胞中的变化特点与正常支气管上皮明显不同。（3）确认了 Aurora A、Aurora B和CCNB1在COPD支气管上皮中基因表达水平增高,与肺癌有重叠,FOXM1是Aurora激酶上游的调控因子,提示了 COPD染色体不稳定可能的致病途径。结论:（1）COPD支气管上皮细胞染色体不稳定程度较正常支气管上皮高;（2）COPD支气管上皮细胞有丝分裂中心体和纺锤体功能有异常,对烟草致癌原NNK的刺激呈现与正常上皮不同的有丝分裂反应,并且与有丝分裂调节关键因子PLK4、PLK1、Aurora A、Aurora B、CHK1的改变有关;（3）COPD支气管上皮细胞对NNK呈现更严重的DNA损伤反应;（4）COPD支气管上皮细胞与非小细胞肺癌细胞都出现了 Aurora A、Aurora B基因的表达上调,Aurora激酶上游的FOXM1基因调节可能在COPD染色体不稳定发展过程中起重要作用。第二部分COPD染色体不稳定生物学标志物的研究目的:筛选COPD外周血染色体不稳定生物学标志物,并且探讨COPD患者染色体不稳定标志物在外周血中的表达特点和临床意义。方法:（1）应用全血培养胞质阻断微核试验（Cytokinesis-block micronucleus,CBMN）检测吸烟COPD观察组、两组对照组（吸烟COPD合并肺癌疾病对照组、不吸烟正常对照组）外周血淋巴细胞中染色体损伤标志物:微核（Micronuclei,MN）、胞质桥（Nucleoplasmic bridges,NPBS）和核芽（Nuclear buds,NBUDS）的表达情况,并分析这些染色体损伤标志物的表达特点以及与COPD患者临床特征的关系。（2）应用转录组高通量测序技术进行外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）转录基因组的表达差异分析,筛选有丝分裂调节关键基因,分析COPD组与正常对照组的有丝分裂调节基因的表达差异,确定表达水平明显改变的基因位点。结果:（1）微核率、核芽率在COPD和COPD合并肺癌组都升高,与健康对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,组间微核率两两比较有统计学差异（P＜0.05）;胞质桥率组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）COPD组微核率与COPD患者的肺功能严重程度和影像学肺气肿程度无明显相关性（P＞0.05）。COPD合并肺癌组的微核率在高龄组、高强度吸烟组高于COPD组（P＜0.05）。（3）微核率ROC曲线分析最佳临界值为10.5‰,敏感度为82%,特异度为48%,AUC为0.7080（95%CI:0.6073～0.8087）。（4）COPD组外周血单个核细胞转录基因组的表达差异分析与正常对照组的Pearson correlation相关性指数为0.5733,两组间总体基因表达有差异。（5）COPD患者体内存在很多有丝分裂功能调节基因的表达改变,其中FOXM1表达上调是重要的基因变化,FOXM1在COPD组外周血单个核细胞中表达明显上升,与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:COPD患者外周血中可以检测到染色体损伤标志物。COPD染色体不稳定程度与健康不吸烟人群、COPD合并肺癌患者比较,介于中间水平。微核率与COPD肺功能严重程度和肺气肿程度不相关,与年龄和吸烟强度有关。微核有可能成为COPD染色体不稳定的外周血形态生物标志物和COPD癌变风险的一种预测因子。COPD染色体不稳定与有丝分裂调节基因表达改变有关,FOXM1有可能成为COPD染色体不稳定外周血基因生物标志物。
其他文献
近年来,伴随高性能计算和大数据的发展,深度学习技术掀起了人工智能领域的研究热潮。作为深度学习的代表性模型,人工神经网络从结构、机理和功能上模拟人脑神经系统,实现高维、复杂数据的端到端学习。随着研究的深入,神经网络架构优化和超参数调优变得极其繁琐且强烈依赖领域专家经验。神经架构搜索（Neural Architecture Search,NAS）旨在自动化神经网络的架构设计流程,降低其对专家知识的依赖
鸡传染性支气管炎（IB）是由禽γ-冠状病毒引起的一种急性接触性传染病,该病给养禽业带来极大的危害并造成严重的经济损失。长期流行病学监控及针对流行毒株的疫苗研发对于该病的防控具有重要的意义。本论文旨在研究中国不同时期鸡传染性支气管炎病毒（IBV）分离株基因型构成及其发生、发展变迁规律与趋势;构建IBV H120疫苗株感染性克隆并进行基因替换、插入等修饰及病毒拯救,快速制备针对流行毒株的IB疫苗候选毒
智能化是全球汽车产业发展的战略方向,自动驾驶正成为各国竞争的焦点。环境感知是实现自动驾驶的首要环节,是汽车决策与控制的基础,为其提供周边多目标位置、速度以及运动行为等必要信息。由于单一传感器自身的固有局限,多传感器融合成为实现复杂环境可靠感知的重要途径,是该领域的前沿技术方向。然而,各类传感器的设计原理和物理特性不同,对环境的描述方法和表现形式均不同,既存在工况适应性的较大差异,又存在耦合对应关系
第一部分Ⅱ型胶原诱导型RA大鼠模型（CIA）的建立及评价目的:建立Ⅱ型胶原诱导型大鼠关节炎模型（Collagen type Ⅱ-induced arthritis,CIA）,并对该动物模型进行评价,探讨P2X7受体（P2X7R）在CIA大鼠体内的表达。方法:选择20只雌性SD大鼠随机分成空白对照组、模型对照组,每组10只。使用牛Ⅱ型胶原在等体积的完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂中乳化制作成浓度为1 m
在全面深化改革的关键时期,如何在激励相容条件下,处理好地方政府之间长期存在的重竞争、轻合作的问题对推动经济高质量发展具有重要的意义。但是长期以来,我国地方政府间协同合作常常停留在纸面和口号上,特别在处理一些具有外部性或者公共品属性的事务时,其协调与协作程度远低于中央政府的预期,甚至出现了越是需要地方政府合作,地方政府协作失灵反而越明显的问题。地方政府之间的合作困境在环境污染治理问题上尤为凸显。环境
第一部分 帕金森病淡漠的临床资料分析目的通过对临床各项量表评分比较,分析帕金森病患者淡漠与病程、运动症状、疾病分期、执行功能之间的相关性。方法选取2017年12月至2019年11月期间在盐城市第三人民医院神经科住院部收治或门诊收治的帕金森病患者,均为初次发病、未经治疗的患者,纳入的全部样本量为52例,通过情感淡漠量表（Apathy Seale,AS）、HAMA和HAMD-17评估并剔除合并抑郁及焦
随着人类社会的发展,人类对于能源的需求日渐增长,而化石燃料的大量使用造成了各种各样的环境问题。开发新型高能量密度的清洁能源替代化石能源是缓解能源短缺与环境污染的重要手段之一。氢能作为一种清洁、高能量密度的能源正在日益受到人们的关注。然而,如何安全有效地储存与运输氢气是制约氢能发展的关键问题之一。贮氢合金主要包括稀土系、钛基合金、固溶体合金、镁基合金等,然而,上述材料至今仍存在放氢温度较高、放氢动力
第一部分 应用孟德尔随机化探索尿酸与肾功能的因果关系目的:在中国常州一个汉族体检人群中,比较SLC2A9基因rs11722228和ABCG2基因rs2231142不同基因型人群的尿酸水平以及eGFR变化,以基因变异为工具变量,应用孟德尔随机化理论探索血清尿酸水平与肾功能的因果关系。方法:纳入在常州市第二人民医院体检中心进行健康体检并自愿参与研究的成年受试者1022名,均为汉族,年龄18-75岁,平
第一部分Syt7在胃癌组织中的表达及与患者临床特征之间的关系目的:检测胃癌组织及胃癌癌旁组织中Synaptotagmin 7（Syt7）的表达情况,并分析Syt7表达水平与胃癌的关系。方法:1.收集苏州大学附属第一医院2015年1月至2018年12月手术切除的胃癌及胃癌癌旁组织的石蜡标本112例,通过免疫组化检测Syt7蛋白的表达。2.对免疫组化的染色结果进行染色评分。3.分析Syt7表达水平与患
对光场中涡旋相位的调控研究衍生出了一个新兴学科——奇点光学,其中涡旋光束就是其主要的研究对象。涡旋光束具有螺旋波前、携带相位奇点和轨道角动量（orbital angular momentum,简称“OAM”）等新颖物理特性,在粒子操控、量子信息、超分辨成像、生物医学、光通信、纳米加工和天文探测等领域具有重要的应用,并已成为包括光学、物理学、化学、生物医学、天文学以及其他交叉学科在内的学科的研究热点