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目的：恶性肿瘤目前是世界上对人类生命健康威胁最大的疾病之一，肿瘤机理的探讨及抗肿瘤药物的开发受到全世界的普遍关注。国内外广泛应用可移植性肿瘤动物模型进行肿瘤机理探讨及抗肿瘤药物筛选，为了比较不同药物的有效性，建立的肿瘤动物模型的特性应稳定，若想保证肿瘤动物模型的稳定性，必须对肿瘤细胞株进行质量控制。科研和药物筛选需要有质量控制的肿瘤动物模型，国内、外此方面的工作尚不充分。小鼠肉瘤180(S180)是最常用的小鼠可移植性肿瘤细胞系之一,广泛应用于小鼠肿瘤动物模型的复制。由于该细胞建立已近百年历史,引进我国亦有50年历史,许多学者报告它已发生较大遗传差异, 并且在不同研究机构中所保存的细胞株亦有很大差异。王秀芳等(2000)对S180细胞进行克隆化处理，得到经筛选的5个克隆细胞株，分别为S180- S2D9、S180-S1B11、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S2D7，其中S180- S2D9性质均一，在致瘤性方面基本保留了原S180特性，已被中国典型培养物保藏中心收藏。目前他们选用已知的单抗和核酸探针与S180-S2D9进行反应，初步建立可以发现肿瘤细胞株遗传变异的检查方法。现代分子生物学技术可以直接对肿瘤细胞株DNA分子进行分析，这使肿瘤细胞株质量控制进入一个新领域。随机<WP=5>扩增多态性DNA(RAPD)可适用于任何一种未知基因核苷酸序列的生物学研究,并且它能客观地反映生物整个基因组的特征。近年来已有大量应用RAPD技术研究物种遗传多样性的报道。本研究拟从23条引物中筛选出能区分5个S180克隆细胞株的特异性引物，以对5个S180克隆细胞株进行RAPD特征分析研究,同时从细胞核型、DNA含量及荷瘤小鼠寿命等方面研究S180-S2D9传代细胞的特性,为进一步比较分析其遗传背景提供基础资料。方法：第一、选用23条引物对5个S180克隆细胞株(S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11 、S180-S1H10 、S180-S1B11)进行RAPD特征的分析研究:1、基因组DNA的制备：用传代细胞系作供体细胞，集细胞总数在1×108个，用PBS液洗涤及TE缓冲液重悬细胞，加入DNA裂解液，55℃过夜，以Tris饱和酚及氯仿－异戊醇（24：1）分别抽提，然后加入醋酸钠及无水乙醇沉淀得到基因组DNA,75％的乙醇洗涤后无菌三蒸水溶解待用。 2、RAPD特征分析：运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11 、S180-S1H10 、S180-S1B11 5个克隆株的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增，反应过程包括40个循环，每个循环包括94℃变性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，最后一次循环后于72℃延伸10min，首次循环前94℃预变性2min。扩增产物以琼脂糖电泳观察结果。第二、对S180-S2D9原代、25代、50代、75代细胞，提取基因组DNA后，运用筛选出的3条引物（1118－1：AAGTCCGCTC、1118－2：GACAGGAGGT、P－04：GTGTCTCAGG）进行RAPD-PCR分析；培养的原代、25代、50代、75代细胞，<WP=6>秋水仙碱处理后6h，取细胞作染色体制片，Gimesa染液染色，油镜观察，计数100个有丝分裂相细胞；原代、50代细胞（原代、50代各约1.0×106个细胞/只）分别接种KM小鼠腹腔；S180-S2D9原代、25代、50代、75代细胞培养液分别离心后,PBS洗2次，用75%乙醇固定，正常小鼠胸腺淋巴细胞做对照，流式细胞仪测DNA含量。结果1 本研究用了23条引物进行扩增，其中只有一条引物未能扩增出RAPD条带，其余22条引物均能扩增出条带，其中3条引物（1118－1：AAGTCCGCTC、1118－2：GACAGGAGGT、P－04：GTGTCTCAGG）在5个克隆株中具有很好的多态性；2 运用上述3条引物对S180-S2D9原代、25代、50代、75代的基因组DNA进行扩增，4代之间的RAPD条带未发现差异；3 S180-S2D9原代、25代、50代和75代细胞，其染色体均数分别为54.170±14.068、56.220±16.580、54.202±10.496、54.380±13.112。染色体数作方差分析表明，两两单位比较均无显著统计学差异（p>0.05）；4 用流式细胞仪对S180-S2D9的原代、25代、50代和75代细胞进行 DNA含量分析，其G0/G1期细胞的均道值分别为59.00, 59.00, 59.00, 57.00，根据G0/G1期细胞的均道值计算它们的DNA含量，分别为0.3890、 0.3542、0.3575、0.3984pg/细胞；5 S180-S2D9原代、50代细胞（原代、50代各约1.5×106个细胞/只）分别接种KM小鼠腹腔，均可产生血性腹水，<WP=7>小鼠存活天数分别为13～23d、13～20d，原代与50代组小鼠存活天数的均数比较无显著统计学差异（p>0.05）。结论1 5个S180克隆株的基因组之间存在差异,引物(1118-1:AAGTCCGCTC;1118-2:GACAGGAGGT;P-04:GTGTCTCAGG)能够区分5个克隆细胞株；2 本实验结果显示S180-S2D9原代、25代、50代、75代之间的RAPD条带没有差异,提示在体外培养条件下，S180-S2D9克隆细胞株传至75代时，RAPD方法未发现遗传变异，染色体计数、DNA含量和荷瘤小鼠寿命结果与RAPD扩增结果相一致。