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目的:研究毛蕊花糖苷（Verbascoside,OC1）对于阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）发病过程中神经递质乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）释放的作用及机理。方法:（1）MTT法检测细胞存活率,确定β淀粉样蛋白（amyloidbeta protein,Aβ）诱导PC12细胞损伤建立AD体外模型的作用剂量和作用时间;将培养的PC12细胞分为:Control组,Aβ1-42（10μmol/L）组,OC1（2μg/m L,10μg/m L）组,阳性药神经节苷脂（Monosialyl tetrahexose ganglioside,GM1）（50μmol/L）组。（2）计算机辅助药物设计模拟OC1与L-type、N-type钙通道对接,虚拟筛选OC1对于钙通道亚型的选择性。（3）钙离子荧光探针Fluo-3/AM检测OC1对AD细胞模型Ca2+浓度的影响。（4）全蛋白磷酸化修饰定量组学研究分析OC1对AD细胞模型磷酸化蛋白表达的影响。（5）Western Blot检测OC1对p-Ca MKⅡ（Thr286）及突触囊泡相关蛋白Synapsin1、p-Synapsin1（Ser603）、Synaptotagmin-1及Synaptophysin表达水平的影响。（6）建立UPLC/Q Exactive MS方法,检测OC1对AD细胞模型ACh释放的影响。（7）试剂盒检测OC1对AD细胞模型中乙酰胆碱酯酶（acetylcholine esterase,ACh E）活力的影响。结果:（1）Aβ1-42（10μmol/L）作用于PC12细胞24h后,MTT检测细胞存活率达（48.91±3.21）%,与Control组比较差异有统计学意义（P<0.05）,表明成功建立了AD损伤模型。给予药物干预后,细胞存活率均有不同程度的升高。（2）OC1与L-type、N-type钙通道的结合能分别为-1.54和138.13,根据结合能越小越易结合的原则,证明OC1更易通过与L-type钙通道结合影响细胞内钙离子的变化。（3）与Control组相比,给予OC1（2μg/m L、10μg/m L）后细胞内钙离子荧光强度明显升高（P<0.05）。与OC1（10μg/m L）组相比,给药EGTA（2mmol/L）螯合细胞外Ca2+,发现细胞内Ca2+荧光强度明显降低,证明OC1可以促进细胞外Ca2+内流（P<0.05）。与OC1（10μg/m L）组相比,给药L-type钙通道阻断剂盐酸维拉帕米（Verapamil hydrochloride）（50μmol/L）及N-type钙通道阻断剂芋螺毒素（ω-Conotoxin GVIA）（2μmol/L）后,细胞内Ca2+荧光强度均降低（P<0.05）,但前者低于后者,证明OC1主要通过与L-type钙通道结合促进细胞外Ca2+内流。（4）通过蛋白差异修饰分析,发现给药OC1（10μg/m L）后有295个蛋白的359个位点表达发生了变化,包括154个位点上调,205个位点下调。通过GO分类、KEGG通路和蛋白结构域三个层面的富集分析,发现给药OC1（10μg/m L）后差异修饰蛋白均显著性的富集到了钙通道的激活。根据富集结果我们对差异修饰蛋白进行KEGG聚类分析,发现给药OC1（10μg/m L）后差异修饰蛋白富集到了Ca2+信号通路（mo04020 Calcium signaling pathway）,在该通路中蛋白p-Ca MKⅡ（Thr286）表达显著上调。（5）Western Blot结果表明,与Control组比,给药Aβ1-42（10μmol/L）后p-Ca MKⅡ（Thr286）与囊泡相关蛋白p-Synapsin1（Ser603）/Synapsin1、Synaptotagmin-1及Synaptophysin的表达均降低。与Aβ1-42组比较,药物干预后p-Ca MKⅡ（Thr286）及囊泡相关蛋白p-Synapsin1（Ser603）/Synapsin1、Synaptophysin及Synaptotagmin-1的表达水平均有所上调（P<0.05）。（6）建立了测定PC12细胞分泌ACh的UPLC/Q Exactive MS方法。ACh在1-100ng/m L浓度范围内线性关系良好,最低定量限为1ng/m L,ACh的回收率高,RSD小于5%;将样本放置（25℃,12h）,冷冻（-80℃,30天）,反复冻融（-80℃,3次）后稳定性良好。结果显示,与Control组相比,Aβ1-42（10μmol/L）组ACh的释放随时间的变化逐渐减少,给药OC1后ACh的释放逐渐增多,并在9min时达到峰值。（7）试剂盒检测发现,与Control组相比,Aβ1-42（10μmol/L）组ACh E的活力显著升高（P<0.05）。与Aβ1-42组相比,给药OC1后ACh E的活力降低（P<0.05）。结论:OC1可以通过与L-type钙通道结合促进细胞外Ca2+内流,增加p-Ca MKⅡ（Thr286）及囊泡相关蛋白表达,促进ACh释放到突触间隙。此外,OC1还可以通过降低ACh E的活性来增加突触间隙ACh的作用时间。综上所述,OC1可以通过影响ACh的各个释放和水解过程而可能被用于AD的治疗。