论文部分内容阅读
目的:克服膀胱癌化疗耐药是临床提高其化疗敏感性的关键问题。缺氧广泛存在于多种实体瘤中,研究表明缺氧通过激活缺氧诱导因子1α(HIF-1α)介导的自噬导致多种肿瘤产生化疗耐药。然而,目前膀胱癌中HIF-1α介导的自噬是否参与化疗耐药尚不明确。因此我们探究缺氧是否通过增加HIF-1α表达诱导保护性自噬从而降低化疗药物吉西他滨诱导的细胞凋亡。方法:1.通过收集20位患者膀胱癌及癌旁正常组织标本,通过免疫组化检测HIF-1α表达;2.CCK8及western b1ot法检测常氧及低氧条件下吉西他滨对膀胱癌细胞增殖抑制率及凋亡蛋白c1eaved caspase3及PARP的表达差异,SPSS17.0计算IC50值;3.低氧单独或联合吉西他滨处理膀胱癌细胞,western b1ot检测自噬标志蛋白LC3,P62,荧光共聚焦观察LC3荧光斑点,透射电镜观察自噬小体;4.加入自噬抑制剂3MA抑制自噬,CCK8,Western b1ot,AnnexinV-PI流式细胞术检测低氧下吉西他滨对膀胱癌胞增殖抑制率、凋亡蛋白及凋亡率相关指标的变化;5.Western b1ot检测低氧下膀胱癌细胞HIF-1α,BNIP3,Bec1in1及LC3表达,采用RNAi技术敲低HIF-1α表达,Western b1ot检测 HIF-1α及 LC3 蛋白变化,CCK8,Western blot,AnnexinV-PI 流式细胞术检测低氧下敲低HIF-1α表达后吉西他滨对膀胱癌胞增殖抑制率、凋亡蛋白及凋亡率相关指标的变化。结果:膀胱癌较癌旁组织明显高表达HIF-1α(P<0.05);吉西他滨在缺氧过程中诱导的细胞凋亡较常氧下相比显著降低;当单独用低氧处理膀胱癌T24及BIU-87细胞时,自噬被诱导,且低氧能够明显增强吉西他滨诱导的自噬;缺氧条件下吉西他滨和自噬抑制剂3MA联合治疗能够显著增加吉西他滨的细胞毒性。低氧诱导的自噬依赖于HIF-1α/BNIP3/Beclin1 信号通路,抑制 HIF-1α下调 BNIP3 和 Beclin1的表达同时导致自噬水平下降。同时下调HIF-1α能够增强缺氧条件下吉西他滨诱导的膀胱癌细胞凋亡。结论:本研究的结果表明,缺氧通过HIF-1α诱导细胞保护性自噬来抵抗吉西他滨诱导的细胞凋亡,靶向HIF-1α相关通路或抑制膀胱癌细胞自噬可能是提高膀胱癌化疗敏感性的重要策略。