论文部分内容阅读
目的：研究鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1, Sphkl)对人结肠癌HT-29细胞生成血管拟态(Vasculogenic Mimicry, VM)的影响及其可能机制。方法：体外培养人结肠癌HT-29细胞,将细胞分为Sphk1抑制组,Sphk1激活组,对照组。Sphk1抑制组加入50μmol/l N,N-二甲基鞘氨醇(N,Ndimethyl-sphingosine, DMS); Sphk1激活组加入100nmol/l佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(phorbol-12-myristate-13-acetate, PMA);对照组加入等量的培养基。培养一段时间后采用MTT法检测细胞生长增殖；透射电镜观察细胞形态学变化；Matrigel三维培养法观察VM形成能力；Transwell小室模型观察细胞侵袭迁移能力的变化,RT-qPCR、Western blot及ELISA技术检测VEGF的表达。结果：DMS显著抑制细胞的增殖、侵袭、迁移能力并促进细胞凋亡；透射电镜可见典型的凋亡特征；三维培养中不能形成管状VM；明显减弱VEGF mRNA及蛋白表达。PMA则显著促进HT-29细胞的增殖、侵袭、迁移能力并抑制细胞的凋亡；透射电镜可观察到细胞增殖特征；促进三维培养中管状VM的形成；明显增强VEGF mRNA及蛋白表达。对照组、DMS组及PMA组的侵袭细胞数分别为：112±6.25；57±8.00；142±5.57。迁移细胞数分别为：69.33±4.04；42±4.16；111±8.03。VEGF mRNA表达量分别为：1；0.74±0.122；1.22±0.075。VEGF蛋白表达分别为：0.39±0.05；0.23±0.02;0.65±0.06。VEGF蛋白分泌分别为：103±8.96；63.89±8.44；201.01±17.93,各指标多组间比较差别均有显著性。结论：Sphk1可促进HT-29细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡,并促进VEGF的表达分泌从而诱导VM的形成。