【摘 要】
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本研究通过发酵提取获得羊肚菌胞外粗多糖（Morchella esculenta polysaccharide,MEP）,色谱层析柱纯化后得到均一组分羊肚菌胞外多糖MEP 2a,然后对均一组分MEP 2a的一级结构、高级结构、体外模拟消化前后结构及生物活性（抗氧化、降血糖血脂）的改变、细胞免疫调节作用等各方面进行了相关研究。羊肚菌多糖的结构鉴定:通过HPLC、GC-MS、UV、FT-IR分析其一级结
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本研究通过发酵提取获得羊肚菌胞外粗多糖（Morchella esculenta polysaccharide,MEP）,色谱层析柱纯化后得到均一组分羊肚菌胞外多糖MEP 2a,然后对均一组分MEP 2a的一级结构、高级结构、体外模拟消化前后结构及生物活性（抗氧化、降血糖血脂）的改变、细胞免疫调节作用等各方面进行了相关研究。羊肚菌多糖的结构鉴定:通过HPLC、GC-MS、UV、FT-IR分析其一级结构,MEP 2a为分子量为139.15×10~4 Da的均一多糖,推断MEP 2a是一种葡萄甘露聚糖,由→1)-β-D-Glcp-（6→、→1）-α-D-Manp-（3,4→、→1）-α-D-Manp-(2→构为主链,支链为α-D-Manp-（1→、→1）-β-D-Glcp-(6→以及α-D-Glcp-(1→。通过DSC和TG检测其热稳定性,验证了MEP 2a是一种稳定的大分子化合物,在300℃以上才会发生降解。通过SEM观察MEP 2a的形态,发现MEP 2a多糖表面不平整,有许多碎片状的颗粒。通过刚果红和AFM发现MEP 2a没有三重螺旋构象。体外模拟消化前后结构和体外抗氧化降血糖血脂活性的改变:多糖在唾液消化过程中没有发生显著的变化,但经过胃液和肠液的消化后分子量都发生了一定程度上的改变,产生了一些小分子量的物质,说明多糖在体外模拟消化过程中部分构型发生改变。通过SEM和AFM可以观察到羊肚菌多糖通过肠液消化后从片状结构变成蜂窝状结构,其形态发生了改变,这可能是由于在消化过程中的p H和酶的作用。MEP 2a的抗氧化以及降血糖活性并没有由于肠胃液的消化而降低其生物活性,通过肠液消化后羊肚菌多糖对DPPH和ABTS自由基的清除率增加,对α-淀粉酶的抑制以及和胆酸盐的结合能力也有一定程度的增加。细胞实验探究羊肚菌多糖的免疫激活活性:结果显示MEP 2a对RAW264.7细胞没有毒性,不会抑制小鼠巨噬细胞的生长,且可以显著增强小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性（p<0.01）。采用NO试剂盒发现羊肚菌多糖显著促进NO的释放,增强小鼠巨噬细胞的免疫力（p<0.05）。采用ELISA试剂盒发现羊肚菌多糖可以增加促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的释放,刺激巨噬细胞的免疫活性（p<0.05）。利用Wb检测MEP 2a刺激免疫活性相关的MAPKs蛋白激酶信号通路,结果表明MEP 2a显著增加了p38,ERK,JNK以及其磷酸化的蛋白表达水平,提高免疫活性。
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