坛紫菜硫酸多糖和龙须菜硫酸多糖的抗腹泻活性研究

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腹泻是一种世界性的人类及动物常见病症之一,特别是在发展中国家,其发病率和死亡率都非常高,引发各国政府及学者的高度关注。研究表明,海洋藻类植物来源的硫酸多糖(Sulfated polysaccharides,SP)具有抑菌、抗炎、免疫调节等多种生物活性,探究硫酸多糖对细菌性腹泻和过敏性腹泻的作用可为腹泻疾病防治提供新思路,也可为抗腹泻功能性产品的研发提供理论基础。以坛紫菜(Porphyra haitanensis)和龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)藻粉为原料,利用高温压力处理结合乙醇沉淀提取获得紫菜硫酸多糖(PHSP(hp))和龙须菜硫酸多糖(GLSP(hp))。PHSP(hp)的平均分子量为165.45 kDa,粘度为0.17 dL/g,硫酸根含量为10.94%。GLSP(hp)的平均分子量为71.87 kDa,粘度为0.10 dL/g,硫酸根含量为11.26%。扫描电镜结果显示,PHSP(hp)的微观结构呈现不规则的几何形状,表面有一定的间隙,松散地叠加;GLSP(hp)的表面结构光滑平整,呈现连续的片状。采用RAW264.7细胞体外实验对PHSP(hp)和GLSP(hp)的免疫调节活性进行分析,结果表明PHSP(hp)和GLSP(hp)均可引起RAW264.7细胞划伤愈合及迁移,且均能够显著促进肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素(IL)-6炎性细胞因子的分泌,其中GLSP(hp)的免疫调节活性较强。本研究针对具有免疫调节活性的PHSP(hp)和GLSP(hp),分别利用小鼠模型探究抗细菌性腹泻及抗过敏性腹泻的活性。在细菌性腹泻小鼠模型中,PHSP(hp)和GLSP(hp)均能够缓解小鼠腹泻等症状,显著降低腹泻指数,同时降低小鼠血清IgA抗体、肥大细胞蛋白酶(mMCP-1)和炎性细胞因子TNF-α的水平。流式细胞术结果表明,与腹泻阳性组小鼠相比,PHSP(hp)和GLSP(hp)均能显著抑制脾脏来源B细胞的增殖和促进调节性T(Treg)细胞的分化,同时其微观结构显示PHSP(hp)和GLSP(hp)可保护空肠绒毛免受模式菌的损害。利用构建的卵清蛋白引起的小鼠过敏性腹泻模型评价并探究PHSP(hp)和GLSP(hp)的抗过敏活性。口服PHSP(hp)和GLSP(hp)均能缓解小鼠腹泻及保护空肠绒毛。ELISA结果表明PHSP(hp)和GLSP(hp)均可显著下调过敏小鼠血清中特异性抗体、组胺、mMCP-1和Th2型细胞因子IL-4的水平;显著上调Th1型细胞因子IFN-γ和Treg相关细胞因子IL-10、TGF-β的水平。流式细胞术结果表明,与过敏阳性小鼠相比,PHSP(hp)和GLSP(hp)能抑制脾脏来源B细胞的增殖和肥大细胞的分化,促进Treg细胞的分化。此外,16S rRNA测序表明PHSP(hp)和GLSP(hp)可通过增加厚壁菌门、减少拟杆菌门的比例调节肠道菌群来缓解小鼠过敏。综上所述,PHSP(hp)和GLSP(hp)具有抗腹泻活性,且GLSP(hp)活性较强,但二者缓解腹泻作用途径存在差异。该研究为缓解腹泻疾病的功能性产品的研发提供理论依据。
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