论文部分内容阅读
秀珍菇(Pleurotus geesteranus)又名白平菇,其学名为黄白侧耳,菇形秀小、白漂,口感脆嫩,菇味清香浓郁,营养丰富,富含蛋白质、多糖、脂肪、维生素和微量元素,人体必需8种氨基酸含量齐全,备受广大消费者喜爱。本论文共有四个部分,分别是秀珍菇子实体多糖的提取分级和抗氧化活性筛选、纯化和理化性质研究、均一组分的结构鉴定和体外抗肿瘤活性的研究。秀珍菇子实体经95%的酒精脱脂处理后,沸水浸提得到粗多糖,再经超滤分级和抗氧化活性筛选,发现PGPB (10KDa<平均分子量<100KDa)组分的含量相对较多,且还原能力最高,同时羟基自由基清除能力和DPPH清除能力也较高,因此选取PGPB进一步研究。秀珍菇子实体粗多糖PGPB经DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephacryl S300、Sephacryl S400层析纯化得到的两个均一组分：水相的PGP1和盐相的PGP2,平均分子量分别为1.3×104Da和>2.0×106Da。选取PGP1进行理化性质的检测,紫外扫描的结果表明其不含蛋白质和核酸。PGP1经乙酰化和甲基化分析后,再结合NMR谱(一维：1HNMR谱、13CNMR谱和二维谱：COSY谱、TOCSY谱、NOESY谱、HMQC谱和HMBC谱)等方法对其结构进行解析。乙酰化结果表明该多糖组分主要由四种单糖组成,分别为D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖,及一未知单糖,GC-MS推测该组分为3(4)-O-甲基-己糖。甲基化后GC-MS分析得出残基分别是端基的甘露糖,6位取代的半乳糖和葡萄糖,还有2,6位取代的3-O-甲基半乳糖,其摩尔比为1：0.25：1.14：0.94。一维和二维的NMR图谱进一步分析得到PGP1组分的大致结构如下：β-D-Manp↓2->6)-α-D-Galp-(1->6)-α-3-O-Me-D-Galo-(1→同时含有少量的6-D-Glcp。超滤分级得到的四个组分(PGPA, PGPB, PGPC, PGPD)和PGP1, PGP2的体外抗肿瘤作用的研究发现,所有组分对S180均具有较好的抑制效果,对正常细胞CHL没有毒副作用。四个超滤组分中,PGPD对肿瘤细胞的抑制率明显高于其他三个组分,并呈现一定的剂量依赖性。而PGP1和PGP2的S180的抑制效果明显优于粗品,说明其中的活性成分主要为多糖成分。