论文部分内容阅读
胰腺癌是全球高发肿瘤之一，具有转移性强，死亡率高等特点。胰腺是腹膜后器官，发病隐蔽，且由于临床缺乏早期诊断胰腺癌有效的指标，导致其早期诊断率低，预后极差，五年生存率＜6%。因此探讨与胰腺癌转移相关分子及其是否具有临床诊断意义，对胰腺癌的诊断、治疗等均有重大意义。膜联蛋白A2（AnnexinA2，ANXA2）在人体组织中均有表达，尤其是在增殖旺盛的细胞中表达较高。大量的实验证据表明，该蛋白在大部分肿瘤细胞中表达增高，与肿瘤的侵袭转移密切相关。膜联蛋白A2的受体（AnnexinA2Receptor，AX2R）也与肿瘤细胞的黏附、侵袭、转移相关，但其在实体瘤中与肿瘤细胞血行转移的研究尚属空白。因此，本课题主要探索ANXA2及其受体在胰腺癌血管生成过程中发挥的作用。本课题首先收集了107例胰腺癌患者、19例急性胰腺炎（AP）患者、30例慢性胰腺炎（CP）患者的血清标本，采用酶联免疫吸附（ELISA）法，对其血清中ANXA2含量进行检测；再利用qRT-PCR和免疫组化实验从基因和蛋白水平验证癌组织中ANXA2的表达水平。并结合患者的临床病理资料对实验结果进行统计分析，探讨ANXA2在胰腺癌中的临床和诊断意义。之后，本实验成功构建ANXA2表达下调的胰腺癌细胞系和AX2R表达下调的血管内皮细胞系，以其为研究对象，采用ELISA、Western Blot、免疫荧光定位，细胞增殖（CCK-8）等实验技术，探讨ANXA2在细胞功能水平对肿瘤诱导的血管生成的影响。最后，我们以ANXA2表达下调的胰腺癌细胞建立裸小鼠移植瘤模型，观察其与对照组（Control）、无关干扰质粒组（NegativeControl, NC）移植瘤的生长差异，以及用免疫组化和免疫荧光分析瘤内ANXA2表达水平及肿瘤诱导新生血管形成的差异。实验结果发现：相比胰腺炎患者，胰腺癌患者血清中的ANXA2表达量较高，单独利用其诊断胰腺癌，比CA199诊断的敏感度和特异度均提高，且癌症漏诊率比CA199（28.0%）低9.3%，两者联合胰腺癌的漏诊率为8.4%。同时，ANXA2在癌组织中表达高于癌旁组织。细胞学实验结果也发现胰腺癌细胞系可以分泌ANXA2，该蛋白可以与血管内皮细胞膜表面的AX2R相互结合，并可通过激活MAPK相关通路蛋白（AKT、ERK1/2）磷酸化，进而促进血管内皮细胞增殖。胰腺癌移植瘤动物模型也证实ANXA2表达下调可以抑制肿瘤诱导的血管生成。因此，综上所述，我们得出结论：在胰腺疾病中，胰腺癌患者组织和血清中ANXA2表达水平较高，是胰腺癌患者差异性表达蛋白。高水平的ANXA2主要来自于胰腺肿瘤细胞，它可以促进血管内皮细胞增殖进而促进肿瘤诱导的新生血管生成，这提示我们，ANXA2不仅可以作为临床区别诊断胰腺癌的潜在标记物，也可以作为抑制胰腺癌血管生成的潜在治疗靶点。