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水稻瘤矮病毒（Rice gall dwarf virus,RGDV）属于呼肠孤病毒科植物呼肠孤病毒属,自20世纪80年代初在泰国发现以来,已在马来西亚、中国、日本和韩国等水稻产区相继发生且有逐年加重的趋势,对水稻生产造成重大危害。目前虽然已经获得了RGDV基因组12个片段的全序列,但对其基因组各片段编码蛋白所进行的功能研究还不多。为此,本论文利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将P3和P8两个主要结构蛋白在昆虫细胞中进行表达,探讨其装配形成病毒样颗粒（Virus-like particles,VLPs）的特点,并对Pnsl2蛋白进行亚细胞定位研究。利用RT-PCR方法获得RGDV的内层衣壳蛋白基因S3,并克隆至pMD-18T载体,EcoRⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒pMD-S3,将S3基因亚克隆到pET-32a表达载体上,转化大肠杆菌（Escherichia coli）E coli Rosetta（DE3）Ⅱ,经IPTG诱导要S3基因获得了表达,SDS-PAGE分析显示表达产物的分子量与预期的重组蛋白分子量相符。将获得的P3重组蛋白免疫大耳白兔制备了多克隆抗体,间接ELISA法测定抗血清效价为1:20480,Western blot印迹分析表明所制备的抗血清具有较强的特异性,可用于核心样颗粒（Core-like particles,CLPs）和病毒样颗粒的组装研究。将S3和S8基因分别克隆到杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBac中,构建二个重组转移质粒:pFB-S3和pFB-S8;将S3和S8基因同时克隆到供体质粒pFastBacDual中,首次构建成双价重组转移质粒pFD-S3/S8。分别将它们转化大肠杆菌DH10Bac,得到三种重组杆粒:rbpFB-S3、rbpFB-S8和rbpFD-S3/S8,经鉴定后分别转染Sf9（Spodoptera frugiperda,Sf9）细胞,获得三种重组病毒:rvpFB-S3、rvpFB-S8和rvoFD-S3/S8。通过四次再感染新鲜Sf9昆虫细胞,裂解后进行SDS-PAGE和Westernblot分析,发现重组病毒rvpFB-S3表达了分子量约为116 kDa的P3蛋白,重组病毒rvpFB-S8表达了分子量约为47 kDa的P8蛋白,重组病毒rvpFD-S3/S8既表达了P3蛋白又表达了P8蛋白,表明RGDV结构基因在昆虫细胞内获得成功表达。将重组病毒感染的Sf9昆虫细胞与昆虫细胞蛋白抽提液混合,10000 r/m离心10min,上清以磷钨酸负染,通过透射电镜观察,rvpFB-S3感染的细胞裂解上清可见到直径约40 nm单层衣壳的的核心样颗粒,共表达P3和P8蛋白的细胞裂解上清可观察到形态和大小都和RGDV病毒粒体一致的病毒样颗粒,但单独表达P8蛋白时并没有观察到病毒样颗粒结构,说明体外共表达P3和P8蛋白可以形成双层衣壳的病毒样颗粒结构。利用Overlap-PCR方法构建了S12基因及其缺失突变体与GFP融合的杆状病毒表达载体,并在Sf9昆虫细胞中对Pnsl2蛋白的亚细胞定位进行了研究。激光共聚焦显微镜观察发现绿色荧光集中于昆虫细胞的细胞核内,当预测的位于Pnsl2蛋白C末端的核定位信号序列(NLS,202KRRPR206)被缺失或碱性氨基酸突变为丙氨酸的突变体,绿色荧光则不能在细胞核中积累,而是与GFP空载体对照类似均匀分布于整个细胞,暗示Pnsl2蛋白具有核定位功能,所预测的NLS（Nuclear localization signal,NLS）可能是一个有功能的核定位信号序列,这是植物呼肠孤病毒属中核定位信号蛋白的首次报道。