[目 的]免疫调控紊乱是新生儿HIBD发生发展的关键机制,脑内多种细胞,如Ns、AGs、OLs和MGs可通过不同作用机制参与由HIBD引起的神经炎症反应,但机制不清。宿主防御肽Cathelicidins是最重要的天然宿主防御肽之一,CRAMP则为小鼠体内表达的唯一 Cathelicidins宿主防御肽家族成员,具有免疫调控和维持免疫稳态的功能。目前的研究表明,它通过与核酸结合参与人体多种疾病的炎症反应过程。但是,其在脑内OLs和Ns的表达及HIBD中可能的作用未见报道。据此,本文对出生9-11 d的C57BL/6J小鼠建立HIBD模型,探究CRAMP在发育脑内Ns、AGs、OLs和MGs中的分布规律,为后续Cathelicidins在HIBD后免疫调控紊乱中的作用机制研究提供新的实验依据。[方法]1.出生后9-11 dC57BL/6J小鼠,通过改良的Vannucci法建立新生儿HIBD模型,通过脑组织大体观和TTC染色判断模型后脑组织损伤程度,通过FJB染色观察新生小鼠HIBD后Ns的坏死情况。2.通过免疫荧光多重染色观察新生小鼠HIBD后,宿主防御肽家族成员CRAMP的阳性细胞数及平均荧光强度的改变及在Ns、AGs、OLs和MGs中的定位、分布及平均荧光强度的改变。[结 果]1.在脑组织大体观结果:Sham组小鼠脑组织色泽均匀,呈半透明乳白色;HIBD后1 d,与Sham组相比,HI-M组小鼠损伤同侧脑组织大体观无明显改变,HI-S组损伤同侧小鼠脑组织出现明显白色梗死液化灶。2.在TTC染色结果:HIBD后3d,与Sham组相比,HI-M组小鼠损伤同侧脑组织TTC染色都呈均匀红色,无明显改变;HI-S组小鼠损伤同侧脑组织有明显白色液化灶出现。3.在FJB染色结果:HIBD后3 d,与Sham组小鼠相比,HI-M组和HI-S组小鼠的皮层梗死中心、皮层梗死周围、CA1、CA2、DG区域的坏死Ns数量明显增多,其中HI-S组的坏死Ns数量增加明显。4.HIBD后CRAMP在发育脑内损伤同侧的免疫荧光结果:除HIBD后7d无明显改变,CRAMP的阳性细胞数量在其余各时间点、各部位均出现增加。且其平均荧光强度除HIBD后1d和3d的皮层梗死周围区及HIBD后1d的CA1区无明显改变,在其余各时间点、各部位出现增加。5.CRAMP在发育脑内Ns中的免疫荧光结果:除HIBD后7 d无明显改变,Ns数量在其余各时间点、各部位均出现减少,但CRAMP阳性的细胞数量未出现变化,说明与CRAMP共定位的Ns阳性细胞数量增多,且CRAMP荧光强度增强,并发生核转移现象。6.CRAMP在发育脑内AGs中的免疫荧光结果:在ML区域,HIBD后AGs数量出现增多,且除HIBD后7 d无明显改变外,与AGs共定位的CRAMP细胞数量增多,平均荧光强度也出现增强。7.CRAMP在发育脑内OLs中的免疫荧光结果:HIBD后3d,OPCs的数量在皮层梗死周围区域出现增多,且CRAMP在损伤的OPCs和成熟OLs上均不存在核转移现象。此外,OPCs和成熟的OLs均表达CRAMP,但未成熟的OLs并未全部表达CRAMP。HIBD后CC区域总的OPCs的数量未见明显改变,但在HIBD后1 d和3 d,与CRAMP共阳性的OPCs数量减少。此外,在HIBD后的各时间点的皮层梗死中心及周围区,OPCs数量和荧光强度未出现明显改变,但HIBD后1 d的皮层梗死周围区,与CRAMP共阳性的OPCs细胞的荧光强度显著增强。除HIBD后7d无明显改变,在其他时间点,CC的厚度均有轻度所上升,但HI-S组的CC条索状结构发生明显断裂;此外,HIBD后1d和3 d,与MBP、DAPI共染的CRAMP的平均荧光强度增强。8.CRAMP在发育脑内MGs中的免疫荧光结果:除HIBD后7 d的皮层梗死中心区无明显改变,在其余各时间点和各区域的MGs数量增多、与MGs共定位的CRAMP的细胞数量增加,平均荧光强度增强,并发生核转移现象。[结论]1.本研究新发现宿主防御肽Catheilincidins家族成员CRAMP能够表达于脑内Ns和OLs,并证实它还能表达于脑内MGs和AGs。2.HIBD后CRAMP在幸存Ns的功能调控及AGs的活化中具有作用,并可能参与了新生小鼠HIBD后MGs介导的神经炎症调控。3.新生小鼠HIBD后,髓鞘出现损伤,CRAMP与HIBD后CC区域OPCs受损有关。