目的:本研究利用分子生物学技术,通过体内实验,观察和胃反流康对实验性胆汁反流性胃炎模型大鼠一般状况、胃黏膜病理组织学、胃动素(MOT)的表达及含量的影响;观察和胃反流康对实验性胆汁反流性胃炎模型大鼠白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)的表达及含量的影响;观察和胃反流康对实验性胆汁反流性胃炎模型大鼠胃泌素(GAS)、胃黏膜前列腺素E2(PGE2)的表达及含量的影响;观察和胃反流康对实验性胆汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA表达的影响,以期对和胃反流康治疗胆汁反流性胃炎有更加全面充分的认识,为中医药治疗胆汁反流性胃炎提供新的理论依据。材料与方法:将60只大鼠(SPF级)随机分为6组,分别为空白对照组、模型对照组、阳性药物(吗丁啉)对照组、和胃反流康低剂量组、和胃反流康中剂量组、和胃反流康高剂量组,每组10只。配制反流液,除空白对照组外,其余各组均采用灌胃方式建立实验性胆汁反流性胃炎大鼠模型,每日1次,连续5周。自造模开始后第2周,各组大鼠均每日1次灌胃给药,直至第5周造模结束。最后一次灌胃后,将各组大鼠禁食24h并处死,应用HE染色结合半定量检测方法,观察和胃反流康对胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜病理组织学的影响;用免疫组化(IHC)法检测胃窦部胃黏膜组织中IL-6、IL-8、MOT、GAS、PGE2表达水平;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清中IL-6、IL-8、GAS、PGE2、MOT的含量,观察和胃反流康对实验性胆汁反流性胃炎模型大鼠IL-6、IL-8、GAS、PGE2、MOT表达及含量的影响;用Western blot法检测胃窦部胃黏膜组织中p38MAPK蛋白的表达,用实时荧光定量PCR法检测大鼠胃黏膜细胞COX-2mRNA的表达,观察和胃反流康对实验性胆汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA表达的影响。结果:一般状态的影响:空白对照组大鼠皮毛色白,润泽光亮,反应灵敏,活动自如,觅食主动,进食量及饮水量正常,大便呈球状;相比之下,模型组大鼠皮毛色黄,干燥无光泽,反应迟钝,目光呆滞,精神萎靡,懒动,进食量及饮水量逐渐减少,形体消瘦,大便溏。和胃反流康高、中、低剂量组和吗丁啉组大鼠一般状况良好,皮毛渐有光泽,进食量与饮水量也逐渐增多,体重逐渐增加,但以和胃反流康高剂量组改善最为明显,和胃反流康中剂量组次之,和胃反流康低剂量组及吗丁啉组大鼠一般状况较上述两组稍差,但明显好于模型组。1.胃黏膜病理组织学观察结果空白对照组肉眼下观察显示:大鼠胃黏膜黏膜层毛细血管和固有的腺体未见明显充血及扩张,镜下病理组织示:黏膜厚度较为正常,极少有炎症反应发生;上皮组织细胞形态大小较一致,排列整齐,呈单柱状,上皮与腺管分界清楚。模型组大鼠胃黏膜肉眼下可见毛细血管扩张充血、水肿,镜下病理组织显示:黏膜层有中性粒细胞和浆细胞等炎性细胞浸润,固有膜内的平滑肌纤维增生,部分上皮出现肠上皮化生等病理变化。与模型对照组比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉对照组大鼠胃黏膜损伤较轻,其中和胃反流康中、低剂量组和吗丁啉组胃黏膜层仍然可见部分炎性细胞浸润,但较模型组病理表现明显减少,上皮有部分出现肠上皮化生现象。和胃反流康高剂量组胃黏膜腺体的大小形状基本一致,上皮排列较整齐,极少发现明显充血及坏死,在黏膜层中有少量的炎性细胞浸润,极少出现肠上皮化生,几乎接近空白组大鼠胃黏膜。2.免疫组化(IHC)法检测结果(1)MOT表达水平与空白对照组相比较,模型组大鼠胃黏膜组织中MOT表达水平明显低于空白对照组,有统计学差异(P<0.01);与模型对照组相比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉组大鼠胃黏膜组织MOT表达水平均明显高于模型组(P<0.01);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康高剂量组大鼠胃黏膜组织MOT表达水平明显高于吗叮啉对照组(P<0.01),和胃反流康中、低剂量组与之比较无显著差异性。(2)IL-6、IL-8表达水平与空白对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织中IL-6表达水平均明显高于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉对照组大鼠胃黏膜组织中IL-6表达水平均明显低于模型组,有统计学差异(p<0.01);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康低剂量组大鼠胃黏膜组织中IL-6表达水平明显高于吗丁啉组(p<0.01),而和胃反流康高、中剂量组大鼠胃黏膜组织中IL-6表达水平虽无显著差异性(p>0.05),但数值与之相比确有下降趋势。与空白对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织中IL-8表达水平均明显高于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中剂量组及吗丁啉对照组大鼠胃黏膜组织中IL-8表达水平均明显低于模型组,有统计学差异(p<0.01),和胃反流康低剂量组与之比较无明显差异性(p>0.05);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康低剂量组大鼠胃黏膜组织中IL-8表达水平明显高于吗丁啉组(p<0.01),而和胃反流康高、中剂量组与之比较虽无明显差异性(p>0.05),但数值确有下降趋势。(3)GAS、PGE2表达水平与空白对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织中GAS表达水平均明显低于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉对照组大鼠胃黏膜组织中GAS表达水平均明显高于模型组,有统计学差异(p<0.01或p<0.05);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康高剂量组大鼠胃黏膜组织中GAS表达水平明显升高(p<0.01),而和胃反流康中、低剂量组与之比较无明显差异性(p>0.05)。与空白对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织中PGE2表达水平明显低于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉对照组大鼠胃黏膜组织中PGE2表达水平均明显高于模型组,有统计学差异(p<0.01);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康高剂量组大鼠胃黏膜组织中PGE2表达水平明显高于吗丁啉组(p<0.01),而和胃反流康中、低剂量组与之比较无明显差异性(p>0.05)。3.酶联免疫吸附法检测结果(ELISA检测)(1)血清MOT含量与空白对照组比较,模型组大鼠血清MOT含量均明显低于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中剂量组及吗丁啉对照组大鼠血清MOT含量均明显高于模型组,有统计学差异(p<0.01),和胃反流康低剂量组与之比较无显著差异性(p>0.05);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康低剂量组大鼠血清MOT含量明显低于吗丁啉组(p<0.01),而和胃反流康高、中剂量组大鼠血清MOT含量虽无显著差异性(p>0.05),但确有上升趋势。(2)IL-6、IL-8含量与空白对照组比较,模型组大鼠血清中IL-6含量明显高于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉对照组大鼠血清中IL-6含量均明显低于模型组,有统计学差异(p<0.01);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康高剂量组大鼠血清中IL-6含量明显低于吗丁啉组(p<0.01),和胃反流康中剂量组与之比较无明显差异性(p>0.05),和胃反流康低剂量组IL-6含量明显高于吗丁啉组(p<0.05)。与空白对照组比较,模型组大鼠血清中IL-8含量明显高于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉对照组大鼠血清中IL-8含量均明显低于模型组,有统计学差异(p<0.01);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康低剂量组大鼠血清中IL-8含量明显升高(p<0.01),而和胃反流康高剂量组与之比较虽无显著差异性(p>0.05),但数值确有下降趋势。(3)GAS、PGE2含量与空白对照组比较,模型组大鼠血清中GAS含量均明显低于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉对照组大鼠血清中GAS含量均明显高于模型组,有统计学差异(p<0.01,p<0.05);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康低剂量组大鼠血清中GAS含量明显低于吗丁啉组(p<0.01),而和胃反流康高、中剂量组与之比较虽无明显差异性(p>0.05),但数值确有上升趋势。与空白对照组比较,模型组大鼠血清中PGE2含量均明显低于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉对照组大鼠血清中PGE2含量均明显高于模型组,有统计学差异(p<0.01);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康高剂量组大鼠血清中PGE2含量明显高于吗丁啉组(p<0.01),而和胃反流康中、低剂量组与之比较则无明显差异(p>0.05)。4.RT-PCR法各组检测结果COX-2mRNA表达水平与空白对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织中COX-2mRNA表达水平明显高于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉对照组大鼠胃黏膜组织中COX-2mRNA表达水平均明显低于模型组,有统计学差异(p<0.01);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康高剂量组大鼠胃黏膜组织中COX-2mRNA表达水平明显低于吗丁啉组(p<0.01),低剂量组与之比较表达水平明显高于吗丁啉组(p<0.05),而中剂量组与之比较则无明显差异(p>0.05)。5.Western Blot法各组检测结果p38MAPK蛋白表达水平与空白对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织p38MAPK表达水平均明显高于空白对照组,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,和胃反流康高、中、低剂量组及吗丁啉对照组大鼠胃黏膜组织中p38MAPK蛋白表达水平均明显低于模型组,有统计学差异(p<0.01);与吗丁啉对照组比较,和胃反流康高剂量组大鼠胃黏膜组织中p38MAPK蛋白表达水平明显低于吗丁啉组(p<0.05),而和胃反流康中、低剂量组与之比较则无明显差异(p>0.05)。结论:1.和胃反流康可显著改善实验性胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜病理组织学,提高血清胃动素(MOT)含量,较好的改善胃黏膜损伤,促进消化间期胃排空及反流液的清除。2.和胃反流康可显著降低实验性胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜炎性细胞因子IL-6、IL-8含量,抑制大鼠胃黏膜炎性细胞因子IL-6、IL-8的表达,减轻反流液对胃黏膜的炎性损害,从而更好的起到保护胃黏膜的作用。3.和胃反流康可显著升高实验性胆汁反流性胃炎大鼠血清胃泌素(GAS)含量,促进大鼠胃黏膜胃泌素(GAS)的表达,较好的改善胃分泌和运动功能,促进胃黏膜修复;和胃反流康可显著提高实验性胆汁反流性胃炎大鼠血清中前列腺素E2(PGE2)含量,促进大鼠胃黏膜前列腺素E2(PGE2)的表达,增强胃黏膜抵抗力,产生细胞保护作用。4.和胃反流康可显著抑制实验性胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA的表达,减轻反流液对胃黏膜的炎性损害,防止BRG模型大鼠胃黏膜肠上皮化生及不典型增生等癌前病变发生的作用。