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炎症性肠病(IBD)是人类和动物常见的慢性炎性胃肠道疾病。主要症状表现为内脏超敏（VH，一种感觉增强的内脏疼痛，伴随肠道蠕动的改变、黏液分泌增多、体重下降、营养不良、发热和食欲不振）。VH或内脏疼痛是一种炎症性肠病的重要特征，但在反刍动物中VH很少报道。过去，大多数研究都是利用结肠炎模型来调查VH。然而，这种模型不适合用来研究回肠炎引发VH的确切机制，因为它的部位、持续时间、微生物群和中枢调节机制不同。因此，我们迫切需要建立一个小肠炎症模型，以研究内脏疼痛或VH的内在机制，并用于评价其药物和非药物治疗的疗效。 疼痛敏化或VH对临床医师来说是一个巨大的挑战，并且在兽医实践中成为一项非常棘手的工作。药物由于长期使用的副作用，例如免疫抑制、肠道出血、神经发育迟滞和上瘾，其治疗并不能取得满意效果。电针是一种非药物治疗方法，在经验丰富的医生恰当地运用时，它通常安全有效。电针是一种相对简单的操作，且其参数容易控制，所以更适合临床应用。电针镇痛涉及了外周和中枢神经系统中多种神经和激素。研究电针镇痛的中枢调节机制已成为了一个重要的话题。越来越多的证据表明，电针可以调节中枢下行通路释放神经递质（5-羟色胺、去甲肾上腺素和谷氨酸）或神经调质（阿片类药物）来抑制痛觉过敏。在慢性疼痛中，电针对中枢神经系统中谷氨酸N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B(NMDAR-2B)和谷氨酸转运体（谷氨酸从细胞外液移除的唯一工具）的影响鲜为人知。研究表明在组织和神经损伤后脊髓中NMDAR-2B受体的激活能导致疼痛敏感。另有研究证明在不同动物疼痛模型中抑制NMDAR-2B受体或增强谷氨酸转运体2（兴奋性氨基酸转运蛋白;EAAT2）能够缓解躯体和神经病理性疼痛和VH。然而，目前尚不清楚电针是否是通过抑制脊髓中NMDAR-2B激活和增强谷EAAT2的含量来调节VH。 在本研究中，将TNBS注射到回肠壁中，诱导回肠炎，并且采用内脏运动对结直肠扩张(CRD)的反应来评估山羊VH强度。在此基础上，采用多次电针刺激回肠炎山羊，以研究其累积镇痛效应，以及对脊髓NMDAR-2B和EAAT2的影响。 1.山羊回肠炎诱导内脏超敏的研究 目的:建立用化学诱导山羊回肠炎性内脏超敏新模型。 方法:在本研究中，将60只健康山羊均分为TBNS组和生理盐水组。通过剖腹手术将体积为1.2 mL的2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)酒精溶液(30 mgTNBS溶解于40％乙醇)或同等体积的等渗盐水注入的末端回肠壁，各组分别于3、7、14、21和28天取6只山羊，采用眼观和显微病理学积分法评价回肠炎的严重程度，ELISA法测定髓过氧化物酶、白细胞介素-1、白细胞介素-6以及肿瘤坏死因子-α的水平，通过测定内脏运动对结直肠扩张压的反应来评价VH。内脏运动反应(VMR)采用其对分级增压（20、40、60、80和100 mmHg）扩张模型（每6秒增一级压）的反应来评估。 结果:与生理盐水组相比，TNBS组山羊表现出明显的透壁病理变化，并且眼观和显微病理学积分、回肠髓过氧化物酶、白细胞介素-1、白细胞介素-6以及肿瘤坏死因子-α水平以及VMR显著增加(P＜0.05)。TNBS组山羊于第3到第21天，出现显著的回肠炎症状，第7到第28天呈现内脏超敏。 结论:本实验通过在山羊回肠壁注射TNBS酒精溶液，成功诱导了可复制的回肠炎和内脏超敏。该模型有助于研究炎症性肠病的发病机理和内脏超敏的机制，以及评估新治疗方案的疗效。 2.电针对TNBS诱导回肠炎山羊脊髓谷氨酸转运体EAAT2和NMDAR-2B受体表达水平的影响 目的:评价多次电针对回肠炎性内脏超敏山羊VH、脊髓谷氨酸转运体EAAT2和NMDAR-2B受体表达水平的影响。 方法:24只动物随机的分为四组，每组6只，分别为生理盐水组、2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)组，TNBS+电针组和假针组。经右腹侧6cm切口打开腹腔，将回肠远端拉出腹腔外。对于TNBS组、TNBS+电针组以及假针组，在距离回盲结合点约15 cm处的回肠壁分5个点注射1.2 mL的TNBS酒精溶液（30mgTNBS溶解于40％酒精）。对于生理盐水组，与其他组相同的处理方法注射等体积生理盐水。分别于TNBS处理后第7、10、13、16、19和22天电针刺激后肢双侧足三里穴，30min，60Hz，3mA。对于假针组，仅将针插入同一穴位30min，但不接受电流刺激。试验羊均采用相同的保定方法。每次电针采后用腹肌电图(EMG)记录山羊内脏运动对结直肠扩张的反应。试验山羊于第22天结直肠扩张测试结束后立即安乐死。小心取出T11脊髓，一分为二。前一段固定于10％福尔马林中，用于免疫组化检查:后一段称重后，冷冻于液氮中，并随即储存于-80℃中，用于RT-PCR和免疫印迹分析。将距离回盲结合处大约15cm处的回肠取出，用于组织学检查。 结果:结果表明多次电针够显著缓解TNBS诱导的山羊VH，但不能缓解假针组VH。RT-PCR、免疫印迹和免疫组化分析结果表明，与生理盐水组相比，TNBS组山羊脊髓中NMDAR-2B表达量显著增加(P＜0.05)，而EAAT2的表达量显著降低(P＜0.01)。与TNBS组相比，电针组EAAT2的表达量显著增加(P＜0.01)，并显著缓降低NMDAR-2B表达(P＜0.01)。然而，假针组中这两种物质无显著变化。 结论:电针能够通过上调TNBS诱导的回肠炎山羊脊髓EAAT2和下调NMDA-NR2B来有效地缓解VH。这些结果表明电针能够有效地减轻胃肠道疾病患者慢性内脏痛和VH。