食药用菌中麦角甾醇的免疫活性及其VD转化

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麦角甾醇,又被称作麦角固醇,它大量的存在于食药用菌当中,它是一种极其重要的医药化工原料,它也是生产激素类药物的中间体,可以用来生产“黄体酮”、“可的松”等药物。当麦角甾醇受到紫外光照射时,可以转化称为维生素D2,是维生素D2的前体。它对确保细胞膜结构的完整性,膜的流动性,膜结合酶的活性,细胞的活力以及细胞运输物质起着重要的作用而且还是微生物细胞膜的重要组成部分。本文对市场上常见的食药用菌中的麦角甾醇的含量进行了测定。对不同条件下麦角甾醇转化维生素D2的含量进行了测定,并且对香菇进行不同的干燥方式,对其中麦角甾醇转化维生素D2方面进行了研究。最后对麦角甾醇进行免疫方面的研究来确定其是否能够提高免疫功能。选取杏鲍菇分离麦角甾醇并且对蝙蝠蛾拟青霉和市场中常见的几种食用蘑菇进行含量测定,建立不同食药用菌中麦角甾醇的RP-HPLC含量测定方法。采用硅胶柱层析法及重结晶法分离纯化,最后鉴定其结构。将这些食药用菌用甲醇超声提取后,用HPLC测定,采用Agilent TC C18(250mm×4.6mm,μm)色谱柱,检测波长283nm,柱温30℃,流动相为甲醇,流速1.0ml·min-1。麦角甾醇在1.56-9.361μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=1)。平均加样回收率为98.7%;RSD为1.3%。不同真菌中麦角甾醇的含量,蝙蝠蛾拟青霉为15.65mg·g-1,平菇为21.43mg·g-1,杏鲍菇为10.16mg·g-1,香菇为13.34mg·g-1,金针菇为9.48mg·g-1,滑子蘑为10.43mg·g-1,海鲜菇为14.42mg·g-1。采用RP-HPLC方法操作简便、灵敏,具有良好的重复性和稳定性,可用于各种真菌中麦角甾醇的含量测定。选取超市采购的香菇,通过阳光照射干燥和自然阴干两种方法将其干燥,粉碎,精密称取两种干燥方法下的干品各1·0g,将其放置于带塞的锥形瓶中,加入无水乙醇20ml,称定重量,之后超声处理1h,放置到室温,称重,用无水乙醇补足其损失的总量,将其过滤,取得滤液。精密称取维生素D2标准品适量,加无水乙醇将其配置成0.79mg-ml-1的溶液,作为对照品溶液,用HPLC测定,色谱柱为Agilent TC C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;流动相为85%~93%乙腈水溶液,梯度洗脱30min,检测波长为265nm,柱温为25℃。维生素D2在1.58-9.48μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=1)。精密度结果RSD为0.28%,精密度良好。平均加样回收率为98.5%;RSD为1.8%。阳光照射和自然阴于两种香菇的维生素D2的含量分别为15.361μg·g-1和5.271μg·g-1,阳光照射可以提高香菇中维生素D2的产量;精密称取麦角甾醇对照品适量,加无水乙醇配制制成1mg-ml-1的溶液,分装到4个带有胶塞的小试管中,每个试管分别装10ml。精密称量麦角甾醇4份,每份10.0mg,平铺在称量纸上。将他们共同置于紫外光源下进行照射,照射时间分别为1h、2h、4h、6h。照射之后将麦角甾醇固体放入10ml容量瓶中,定容到10ml,配置成1mg·ml-1的溶液。分别精密称取麦角甾醇对照品适量,加无水乙醇配制制成lmg-ml-1的溶液。精密称取维生素D2标准品适量,加无水乙醇将其配置成0.79mg-ml"1的溶液,作为对照品溶液,用HPLC测定,色谱柱为Agilent TC C18(250mm×4.6mm,5um)色谱柱:流动相为85%-93%乙腈水溶液,梯度洗脱30min,检测波长为265nm。不同条件下维生素D2的含量,溶液照射1小时的为1.00mg-g-1,溶液照射2小时的为1.Olmg·g-1,溶液照射4小时的为6.95mg·g-1,溶液照射6小时的为2.16mg-g-1,固体照射1小时没有维生素D2检出,固体照射2小时没有维生素D2检出,固体照射4小时的为1.06mg·g-1,固体照射6小时没有维生素D2检出。最终溶液照射4h维生素D2的含量最高,其收率为0.7%麦角甾醇的转化率为21%,溶液照射所得维生素D2明显比固体照射所转化维生素D2的含量高。免疫活性实验采用刀豆蛋白A (ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验和小鼠碳廓清实验的方法进行免疫功能检验,结果表明麦角甾醇对小鼠离体T淋巴细胞具有抑制作用而对小鼠整体具有增强免疫力的作用。
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