【摘 要】
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广陈皮中含有的多甲氧基黄酮类化合物相比于其他黄酮类物质有更强的作用效果,对心肺、内分泌系统具有一定的保护作用。急性肺损伤是危重病症之一,主要是由肺部产生的过度炎症反应引起的,在临床上较为常见,目前尚无有效的治疗手段。本研究旨在探究多甲氧基黄酮提取物和川陈皮素的生理活性,评价对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的抗炎和抗氧化效果。采用超声波辅助提取法从广陈皮中提取多甲氧基黄酮粗提物,再通过D101大孔吸附树
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广陈皮中含有的多甲氧基黄酮类化合物相比于其他黄酮类物质有更强的作用效果,对心肺、内分泌系统具有一定的保护作用。急性肺损伤是危重病症之一,主要是由肺部产生的过度炎症反应引起的,在临床上较为常见,目前尚无有效的治疗手段。本研究旨在探究多甲氧基黄酮提取物和川陈皮素的生理活性,评价对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的抗炎和抗氧化效果。采用超声波辅助提取法从广陈皮中提取多甲氧基黄酮粗提物,再通过D101大孔吸附树脂、高速逆流色谱、HPLC、UPLC-MS和1H NMR获得川陈皮素和桔皮素单体,对其纯度和结构进行鉴定。小鼠急性肺损伤模型的建立选取实验中使用率最高的鼻腔滴注脂多糖法,通过观察肺组织病理学变化、肺损伤评分、肺/湿干重比;测定肺组织和血清中氧化损伤指标的含量及活性;酶联免疫吸附法测定血清中促炎因子在蛋白水平上的表达,实时荧光定量PCR法检测肺组织中促炎因子的m RNA表达;最后采用免疫印迹法评价NF-κB和MAPK信号通路中重要蛋白的表达,探究二者对小鼠急性肺损伤的影响,为广陈皮中功能性成分的进一步有效开发和利用提供理论参考,同时也为临床上治疗急性肺损伤等炎症提供理论支持。本研究本文主要结果如下:1.广陈皮中多甲氧基黄酮的提取与结构鉴定(1)采用超声波辅助提取的方式提取多甲氧基黄酮粗提物,建立了检测川陈皮素和桔皮素含量的HPLC方法,结果表明所采用的实验方法良好可行。多甲氧基黄酮提取物中80%约为川陈皮素和桔皮素的混合物,其中川陈皮素含量约占50%,桔皮素约占30%,说明广陈皮中主要的多甲氧基黄酮物质是川陈皮素。(2)D101大孔吸附树脂分离纯化后川陈皮素和桔皮素的含量分别增加了3.7倍和3.1倍,说明该方法在富集多甲氧基黄酮的同时可去除其他杂质,对柑橘中的多甲氧基黄酮有明显的提纯效果。(3)经高速逆流色谱分离纯化后,所得单体经UPLC-MS、1H NMR分析,结果证明该方法可获得纯度为97.52%的川陈皮素和92.08%的桔皮素,所得质量分别为7.12 mg和5.83 mg。2.多甲氧基黄酮提取物和川陈皮素对小鼠急性肺损伤的抗氧化和抗炎影响(1)以川陈皮素低剂量组(25 mg/kg)、中剂量组(50 mg/kg)、高剂量组(100mg/kg)和多甲氧基黄酮提取物组(250 mg/kg)灌胃急性肺损伤小鼠,与对照组相比,模型组小鼠在脂多糖滴鼻6 h之后肺组织中肺泡壁和间隔增厚,肺组织损伤明显,中性粒细胞浸润,肺损伤评分和肺湿/干重比显著升高,说明造模成功。(2)肺组织和血清中髓过氧化物酶和丙二醛的含量及活性上升,谷胱甘肽过氧化物酶的活性下降,50 mg/kg川陈皮素组和250 mg/kg多甲氧基黄酮提取物组相比对照组差异极显著(P<0.01),说明二者对急性肺损伤小鼠的抗氧化效果明显。(3)酶联免疫吸附法实验表明,50 mg/kg川陈皮素组和250 mg/kg多甲氧基黄酮提取物组能显著抑制急性肺损伤小鼠血清中肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6和白细胞介素-1β的产生,实时荧光定量PCR法对肺组织中三种促炎因子在m RNA上的表达情况与上述一致,同样能显著下调各促炎因子的表达。3.多甲氧基黄酮提取物和川陈皮素对小鼠急性肺损伤相关信号通路的影响免疫印迹法分析表明,50 mg/kg川陈皮素组和250 mg/kg多甲氧基黄酮提取物组能下调急性肺损伤小鼠中炎症通路NF-κB和MAPK的表达,可显著抑制特征蛋白P65、P38、ERK和JNK的磷酸化程度及IκB的降解,对脂多糖引起的小鼠急性肺损伤起到保护作用。
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