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目的研究线粒体钙单向转运体（mitochondrial calcium uniporter,MCU）在小鼠顺铂耳毒性中的作用及其机制,为临床防治顺铂耳毒性聋提供新思路。方法1、在体实验选取20只6周龄BALB/c小鼠,随机平均分为对照组、顺铂组和顺铂+Ru360组（Ru360为MCU的特异性抑制剂）及Ru360组。顺铂组小鼠给予腹腔注射顺铂溶液（4.5mg/kg/d）,连续5d;顺铂+Ru360组小鼠提前1d给予腹腔注射Ru360溶液（240mg/kg/d）进行预处理,然后在接受腹腔注射顺铂溶液（4.5mg/kg/d）前30min给予Ru360溶液（240mg/kg/d）处理,连续5d;Ru360组小鼠给予腹腔注射Ru360溶液（240mg/kg/d）,连续6d;对照组小鼠给予腹腔注射等量生理盐水,连续5d。应用听脑干反应（auditory brainstem response,ABR）检测小鼠听功能;应用耳蜗基底膜铺片和荧光染色观察小鼠耳蜗外毛细胞（outer hair cells,OHCs）缺失和内毛细胞（inner hair cells,IHCs）带状突触数量变化;同时应用免疫荧光染色和图像分析技术检测小鼠耳蜗中MCU表达变化。2、离体实验将HEI-OC1细胞分为对照组、顺铂组和顺铂+Ru360组。对照组给予正常培养基,顺铂组给予含有20μM顺铂的培养基,顺铂+Ru360组给予含10μM Ru360和20μM顺铂的培养基,各组均培养24h。采用CCK-8检测HEI-OC1细胞活力,免疫荧光染色和western blot技术检测HEI-OC1细胞中MCU蛋白水平;应用Rhod-2 AM Ca2+荧光探针和Mito SOX红色荧光探针分别检测HEI-OC1细胞线粒体中Ca2+水平及ROS水平,western blot技术检测cleaved-caspase 3表达。结果1.ABR和Ⅰ波振幅检测结果显示,与对照组相比,顺铂组小鼠的ABR阈值和Ⅰ波振幅均显著升高（P<0.01）;顺铂+Ru360组与顺铂组相比显著降低（P<0.01）;Ru360组与对照组相比无显著性差异（P>0.05）。2.小鼠耳蜗OHC计数结果显示,顺铂组小鼠耳蜗OHC缺失率较对照组明显增大（P<0.01）;与顺铂组相比,顺铂+Ru360组底回OHC缺失率明显减小（P<0.01）;Ru360组与对照组相比无显著性差异（P>0.05）。3.小鼠耳蜗IHC带状突触染色结果显示,与对照组相比,顺铂组小鼠耳蜗内单个IHC的带状数量显著减小（P<0.01）;顺铂+Ru360组单个IHC带状突触数量与顺铂组相比显著增多（P<0.01）;Ru360组单个IHC带状突触数量与对照组相比无明显变化（P>0.05）。4.小鼠耳蜗MCU免疫荧光染色及图像分析结果显示,顺铂组小鼠毛细胞及螺旋神经节内MCU表达水平与对照组相比明显升高（P<0.01）;顺铂+Ru360组小鼠毛细胞及螺旋神经节内MCU表达水平与顺铂组相比明显降低（P<0.01）。5.MCU免疫荧光染色结果显示,MCU定位于HEI-OC1细胞的线粒体。Western blot结果显示,顺铂组HEI-OC1细胞内MCU蛋白水平较对照组显著升高（P<0.01）;顺铂+Ru360组HEI-OC1细胞内MCU的蛋白水平与顺铂组比较则显著降低（P<0.01）。6.CCK-8结果显示,顺铂组HEI-OC1细胞活力与对照组相比显著降低（P<0.01）;顺铂+Ru360组HEI-OC1细胞活力较顺铂组显著升高（P<0.01）。7.Western blot检测结果显示,顺铂组HEI-OC1细胞内cleaved-caspase3表达与对照组相比显著增多（P<0.01）;顺铂+Ru360组HEI-OC1细胞内cleaved-caspase 3表达则较顺铂组显著减少（P<0.01）。8.Rhod-2 AM Ca2+荧光探针检测结果显示,顺铂组HEI-OC1细胞线粒体内Ca2+水平与对照组相比显著升高（P<0.01）;顺铂+Ru360组HEI-OC1细胞线粒体内Ca2+水平与顺铂组相比明显降低（P<0.01）。9.Mito SOX红色荧光探针检测结果显示,与对照组相比,顺铂组HEI-OC1细胞线粒体内ROS水平显著升高（P<0.01）;顺铂+Ru360组HEI-OC1细胞线粒体内ROS水平与顺铂组相比则显著降低（P<0.01）。结论MCU介导了顺铂对小鼠的耳毒性损伤,抑制MCU可降低顺铂诱导的线粒体钙超载,从而减轻顺铂的耳毒性,提示MCU为临床防治顺铂耳毒性的潜在靶点。