荧光免疫层析技术是利用荧光标记物定量核酸、蛋白质等生物分子的一种技术,在生物、医学等领域有着巨大的应用前景,其中荧光微球是荧光免疫层析检测中的关键原料。目前,国内外制备荧光微球的方法主要是溶胀法、乳液聚合法和分散聚合法。溶胀法制备的微球存在荧光泄露的情况,导致微球荧光强度不稳定;乳液聚合法和分散聚合法制备微球中需要添加乳化剂和分散剂,导致后处理困难,对荧光微球与生物分子之间的偶联造成一定的影响,这限制了荧光免疫层析技术的推广与应用。因此,制备出多种不同荧光波长、荧光强度高和稳定性好的荧光微球具有重要研究意义。首先,针对溶胀法制备荧光微球中会存在荧光染料泄露的情况,本文设计合成五种可聚合荧光单体:荧光素单体（fluorescein monomer,Flu）、萘酰亚胺单体（Naphthalimide monomer,Nap）和萘酰亚胺三苯胺单体（Naphthalimide triphenylamine monomer,Ntpa）,吡咯并吡咯二酮单体1（DPP1）和吡咯并吡咯二酮单体2（DPP2）,并对五种可聚合荧光单体进行了表征。结果表明Flu在二氯甲烷和苯乙烯中的最大吸收波长为460 nm,最大荧光发射波长为557 nm。Nap在二氯甲烷中的最大吸收波长为400 nm,最大荧光发射波长为508 nm;在苯乙烯中的最大吸收波长为396nm,最大荧光发射波长为499nm。Ntpa在二氯甲烷中的最大吸收波长为428 nm,最大荧光发射波长为628 nm;在苯乙烯中的最大吸收峰波长为424nm,最大荧光发射峰波长为544nm。其次,本文利用无皂乳液聚合Flu和Nap制备表面羧基化聚苯乙烯荧光微球,并探讨苯乙烯含量、丙烯酸含量、反应温度、引发剂含量、搅拌速度和可聚合荧光单体的含量对荧光微球尺寸大小、粒径分布、紫外可见吸收和荧光性能以及形貌的影响。结果表明:制备的羧基化荧光素聚苯乙烯荧光微球粒径为213.3 nm,PDI=0.064,羧基化荧光素聚苯乙烯荧光微球的荧光强度为127.5 a.u.,激发波长为460 nm,最大荧光发射波长为535 nm;制备的羧基化萘酰亚胺聚苯乙烯荧光微球粒径为260.9nm,PDI=0.033,羧基化萘酰亚胺聚苯乙烯荧光微球的荧光强度为荧光强度为366.3 a.u.,激发波长为400 nm,最大荧光发射波长为495 nm。最后,本文设计绿色荧光免疫层析技术用于定量检测人绒毛膜促性腺激素（HCG）。从绿色荧光微球标记抗体β-HCG数量、结合垫HCG绿色荧光免疫探针数量及硝酸纤维素膜（NC膜）上α-HCG抗体包被数量、检测时间等几个方面进行研究和优化。在最佳的实验条件下,对荧光定量检测试纸的最低检测限、线性范围、精密度、准确度和特异性等方面进行性能评价。该方法检测HCG的检测限为 27.3IU/L,标准曲线为 y=0.01179x-2.961,R2=0.974,检测范围为 27.3IU/L-5000IU/L,与PCT、CRP、BSA无交叉反应,检测时间为45min。