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目的:1.腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)的方法,建立糖尿神经病变大鼠模型,以腺相关病毒9(AAV9)介导神经生长因子(NGF)基因转染,研究目的基因NGF对糖尿病神经病变大鼠心肌中NGF、降钙素基因相关肽(CGRP)表达量和神经纤维分布的影响。2.以腺相关病毒9(AAV9)介导神经生长因子(NGF)基因转染,研究NGF对糖尿病神经病变大鼠急性心肌缺血/再灌注(I/R)期间心功能参数的影响。方法:研究在以下几个方面进行:1.NGF基因转染对糖尿病感觉神经病变大鼠心肌NGF和CGRP表达的影响:将28只健康雄性SD大鼠(200-250g),随机法分为4组(n=7):对照(Control)组、DM手术对照(Sham)组、DM空泡病毒(DA)组、DM NGF转染(DN)组。常规条件喂养,实验共历时8周。喂养后1周末,除对照组外,其余组大鼠禁食12小时腹腔注射链脲佐菌素(STZ,50mg/kg)以建立糖尿病模型。给药后24小时测量尾静脉血糖,然后连续七天每天定期测量血糖,数值大于16.7mmol/L为糖尿病造模成功。同时,每周测量大鼠尾部甩尾潜伏期并比较相关变化。第3周末,腹腔注射水和氯醛麻醉,机械通气下,进行心肌点注射NGF基因转染。第8周末,通过酶联免疫吸附实验(ELISA),分析4组大鼠心肌NGF、CGRP的表达量改变,运用荧光显微镜定性观察NGF、CGRP的表达和心肌神经纤维分布密度改变。2.NGF基因转染对糖尿病大鼠急性I/R期间心功能的影响。实验分为4组:对照(Control)组、DM手术对照(Sham)组、DM空泡病毒(DA)组、DM NGF转染(DN)组。与第一部分相同饲养条件,共历时8周。除Control组外,其它大鼠经腹腔注射STZ(50mg/kg)建立糖尿病大鼠模型。第3周末,腹腔内注射水合氯醛麻醉,在机械通气下开胸行大鼠心肌点注射转导NGF基因。在第8周末,心肌进行急性I/R,记录这期间4组大鼠心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压力的最大上升速率(+dp/dtmax)以及左心室内压力的最大下降速率(-dp/dtmax),比较急性心肌I/R期间心功能指标的改变。结果:1.经过7周的糖尿病病程后,与Control组比较,糖尿病3组大鼠甩尾潜伏期在腹腔注射STZ 2周后发生延长,自第5周起甩尾潜伏期出现显著延长(P<0.05);与Control组比较,Sham和DA组2组心肌NGF、CGRP表达显著降低(P<0.05),神经纤维分布密度下降;与Sham和DA组2组比较,DN组心肌NGF、CGRP表达显著升高(P<0.05),神经纤维分布密度增加。2.经AAV9介导NGF基因转染后,与Control组相比,其余3组LVSP、HR、+dp/dtmax、-dp/dtmax明显下降(P<0.05),LVEDP明显上升(P<0.05);与Sham和DA组比较,DN组LVSP,HR明显升高及LVEDP明显下降(P<0.05),而+dp/dtmax、-dp/dtmax差异无显著意义。结论:1.糖尿病感觉神经病变大鼠,心肌内源性NGF和CGRP表达降低,神经纤维分布减少。转染NGF后心肌组织中NGF和CGRP的表达上调,神经纤维病变得到改善。2.心肌点注射AAV9介导的NGF基因可以有效地减轻糖尿病大鼠心脏I/R期间心功能的损伤,增加糖尿病大鼠心脏的防御能力,机制可能是NGF的表达上调促进了神经的修复,促进CGRP表达升高,使缺血区心肌外源性NGF和CGRP表达上调。