随着人类基因组计划的完成和功能基因研究的开展，可用于基因治疗的功能基因越来越多。基因治疗越来越可能成为铲除人类难治性疾病的利剑。基因治疗首要的关键技术是如何将目的基因输送并进入到特定的靶细胞，使之高效的表达外源基因，因而对基因治疗载体的选择一直是困扰基因治疗深入研究的难题。自七十年代末提出病毒载体的概念以来，应用于基因治疗研究的缺陷性病毒载体种类越来越多，应用也越来越广泛。但是，单纯疱疹病毒载体的神经毒性，腺病毒载体的免疫原性和逆转录病毒随机整合的致癌性均限制了它们在中枢神经系统疾病中的应用。rAAV载体以其安全性好、宿主范围广、转染效率高等几方面的突出优势而倍受关注，是目前中枢神经系统基因治疗的良好载体。 但是，rAAV制备困难，是目前阻碍以rAAV为载体进行基因治疗研究的难题之一。现在所采用的rAAV的制备方法操作复杂，对设备要求高，在普通实验室难以完成。如何优化一种简便易行，对实验条件要求不高，可满足动物实验的需要，在普通实验室就可以完成的rAAV的重组和纯化方案对rAAV为载体的基因治疗的研究有重要的推动作用。 此外，通用型的rAAV并不能很好的满足缺血性脑血管病和脑胶质细胞瘤基因治疗的需要。通用型CMV启动子的腺相关病毒载体长期表达目的基因，对脑缺血进行基因治疗时会导致血管过度增生和促进潜在肿瘤生长，在基因治疗的安全性方面存在一定的缺陷，如果改进病毒载体启动子，使目的基因仅在脑缺血时表达，就可以在安全性方面取得更加良好的效果。而在脑胶质细胞瘤治疗方面：神经元对rAAV的亲和能力比胶质细胞强，因此对于毒性基因治疗胶质细胞肿瘤必须采用胶质细胞特异性表达的rAAV，来实现毒性基因的选择性表达。 基于以上原因，本课题对质粒辅助2型重组腺相关病毒的制备及其针对脑缺血和胶质细胞瘤基因治疗的改建进行了研究。 质粒辅助2型重组腺相关病毒制备方法的优化：本研究采用质粒辅助腺相关病毒重组系统，通过磷酸钙质粒共转染的方法，在HEK293T细胞内合成rAAV，通过氯仿—PEG8000／NaCl—氯仿法接合超滤纯化rAAV病毒。通过蛋白电泳和Western杂交检测病毒外鞘蛋白，斑点杂交和病毒转染检测病毒的物理和生物滴度证实优化后的该方法可以获得高滴度的rAAV，可满足小动物实验的需要，对