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第一部分1-磷酸-神经鞘氨醇干预化疗对S180荷瘤小鼠卵巢功能损害和抑瘤效果的研究研究目的：1、探讨凋亡抑制因子—1-磷酸-神经鞘氨醇(S1P)对环磷酰胺(CTX)联合顺铂(DDP)诱导的S180荷瘤小鼠卵巢功能损害的干预作用及其对肿瘤化疗效果的影响。2、探讨S1P干预化疗后卵巢功能损害的可能作用机制。研究方法：1、将80只C57BL/6雌性小鼠随机选取14只作为空白对照组(A组),余皮下接种S180肿瘤细胞后随机分为三组,即荷瘤对照组(B组)、单纯化疗组(C组)、S1P+化疗组(D组),每组22只。用药期间动态观察小鼠动情周期及肿瘤体积变化,于用药前、给药第11天左右、第26天左右的动情间期分批处死小鼠,分别称取体重、卵巢重量及肿瘤重量；采用酶联免疫吸附法(ELISA)动态检测用药前后各组小鼠血清的卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平的变化；卵巢组织连续病理切片,观察卵巢的形态学变化并计算具有正常结构的原始卵泡、生长卵泡数量；免疫组织化学法检测原始-初级卵泡、生长卵泡中Bax、 Bcl-2蛋白表达；透射电镜观察各组卵泡的凋亡情况。于给药第30天左右每组剩余小鼠按2：1分别与成年雄性小鼠合笼,观察生育情况。2、统计学处理采用SPSS10.0统计软件,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两组以上数据比较采用单因素方差分析,进行方差齐性检验,若方差齐,组间比较采用LSD进行两两比较；若方差不齐采用采用近似F检验Welch法,组间比较采用DunnettT3进行两两比较。检验水准α=0.05,若P<0.05为差异有统计学意义。研究结果：1、血清基础性激素水平：给药前,各组血清FSH、 LH、 E2水平无明显差异(P>0.05)。给药第11左右,单纯化疗组血清FSH、E2水平与各组差异有统计学意义(P<0.01)；血清LH水平组间无明显差异(P>0.05)。给药第26天左右,单纯化疗组血清FSH、 LH、E2水平均与各组有明显差异(P<0.01)；两观察阶段中S1P+化疗组血清FSH、 LH、 E2水平与两对照组均无明显差异(P>0.05)。2、各级卵泡数量：用药第11天左右,单纯化疗组原始卵泡数明显低于其余三组(P<0.01)；其生长卵泡数亦明显少于两对照组(P<0.01)。用药第26天左右,单纯化疗组原始卵泡数、生长卵泡均明显低于其余三组(P<0.01)。用药第11天、第26天左右,S1P+化疗组各级卵泡数与空白对照组、荷瘤对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。3、Bax及Bcl-2的蛋白表达：原始-初级卵泡中Bax及Bcl-2蛋白表达,各组间比较均无明显差异(P>0.05)；生长卵泡中Bax的表达在单纯化疗组明显升高,与各组相比均有统计学意义(P<0.01)；生长卵泡中Bcl-2表达S1P组高于其余各组,但仅与单纯化疗组有统计学意义(P<0.01),单纯化疗组与两对照组相比均无统计学差异(P>0.05)。4、肿瘤重量和抑瘤率：单纯化疗组、S1P+化疗组肿瘤重量与荷瘤对照组相比均有显著性差异(P<0.01),且两组的抑瘤率均高于60%；两组小鼠的皮下肿瘤体积增长速度较荷瘤对照组均受到明显抑制。5、颗粒细胞、卵母细胞超微结构：电镜下在各组早期卵泡中见到卵母细胞凋亡改变,在生长卵泡的卵母细胞、颗粒细胞亦有凋亡改变,以颗粒细胞凋亡改变典型。其中单纯化疗组生长卵泡的颗粒细胞凋亡比例高。结论：S1P可以在不影响肿瘤化疗效果的同时,预防化疗对小鼠卵巢功能的损害；其保护化疗对小鼠卵巢功能的作用机制可能与调节凋亡基因Bax及Bcl-2的表达相关。第二部分左归丸加黄芪干预化疗对S180荷瘤小鼠卵巢功能损害和抑瘤效果的研究研究目的：1、结合中医传统理论和辨证分型,探讨复方左归丸加黄芪在干预环磷酰胺(CTX)联合顺铂(DDP)诱导的S180小鼠生殖内分泌功能损害的基础上对S180小鼠皮下肿瘤生长的影响。2、探讨左归丸加黄芪干预化疗对卵巢损害的可能作用机制。研究方法：1、将80只C57BL/6雌性小鼠随机选取14只作为空白对照组(D组),余皮下接种S180肿瘤细胞后随机分为三组,即模型对照组(A组)、化疗组(B组)、中药+化疗组(C组),每组22只。用药期间动态观察小鼠动情周期及肿瘤体积变化,于用药前、给药第11天左右、第26天左右的动情间期分批处死小鼠,分别称取体重、卵巢重量及肿瘤重量；采用酶联免疫吸附法(ELISA)动态检测用药前后各组小鼠血清的卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平的变化；卵巢组织连续病理切片,观察卵巢的形态学变化并计算具有正常结构的原始卵泡、生长卵泡数量;免疫组织化学方法检测原始-初级卵泡、生长卵泡中Bax、 Bcl-2蛋白表达：透射电镜观察各组卵泡的凋亡情况。于给药第30天左右每组剩余小鼠按2：1分别与成年雄性小鼠合笼,观察生育情况。2、统计学处理采用SPSS10.0统计软件,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两组以上数据比较采用单因素方差分析,进行方差齐性检验,若方差齐,组间比较采用LSD进行两两比较；若方差不齐采用采用近似F检验Welch法,组间比较采用DunnettT3进行两两比较。检验水准a=0.05,P<0.05为差异有统计学意义。研究结果：1、血清基础性激素水平：给药前,各组间比较血清FSH、 LH、 E2水平均无明显差异P>0.05。给药第11天,FSH, E2水平：B组与各组均有显著性差异(P<0.01),但C组与两对照组差异不明显(P>0.05)。LH水平：B组、C组无明显差异(P>0.05)；但B组明显高于两对照组(P<0.01)。给药第26天,FSH、 LH水平：B组与各组均有显著性差异(P<0.01),但C组与两对照组差异不明显(P>0.05)。E2水平：B组、C组无明显差异(P>0.05)；B组明显低于两对照组(P<0.01)。2、各级卵泡数量：给药第11、26天左右,化疗组各级卵泡数均与其余三组有明显差异(P>0.01)；中药+化疗组各卵泡数与两对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。3、Bax及Bcl-2蛋白表达：原始-初级卵泡的Bax及Bcl-2蛋白表达量各组间比较均无明显差异(P>0.05)。生长卵泡中Bax化疗组表达明显升高,但与中药+化疗组相比无统计学差异(P>0.05)；与两对照组相比均有统计学意义(P<0.01)；中药+化疗组Bcl-2的表达明显高于余各组(P<0.01)4、肿瘤重量及抑瘤率：A组均明显高于C组、B组(P<0.01)；后两组间差异不显著(P>0.05)；抑瘤率：B、C组的抑瘤率明显高于60%。5、颗粒细胞、卵母细胞超微结构：电镜下在各组早期卵泡中见到卵母细胞凋亡改变,在生长卵泡的卵母细胞、颗粒细胞亦有凋亡改变,尤以颗粒细胞的凋亡改变典型。其中单纯化疗组生长卵泡中颗粒细胞凋亡较各组明显。结论：左归丸加黄芪对化疗后小鼠卵巢的生殖内分泌功能损害有保护作用,并可增强化疗对肿瘤抑制作用；其保护化疗后小鼠卵巢功能的作用机制可能与调节卵巢凋亡基因Bc1-2/Bax的表达相关。