肠杆菌广泛存在于人类和动物的胃肠道以及日常环境中,是一种常见的条件致病菌,随着抗生素的滥用该类菌已经对常用抗菌药物产生不同程度的耐药性,不但制约了畜牧业的发展,还严重威胁到人类的公共卫生安全。研究表明,肠杆菌在临床上的检出率及耐药率连年攀升,其中以大肠杆菌的耐药率最为严重。大肠杆菌的高耐药率已使其成为了耐药基因的储存库,在耐药基因的水平传播上扮演一个重要的角色。为此,本研究拟对吉林省部分地区养殖场送检样本中的动物源大肠杆菌进行分离鉴定、药物敏感性监测及耐药基因分析,研究结果可为吉林省兽医临床药物的科学合理使用奠定基础,同时也能为肠杆菌耐药基因环境的研究提供理论依据。主要研究内容如下:1.不同动物源大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析针对吉林省部分地区16个不同动物源养殖场送检的246份样本进行细菌的分离、鉴定,通过革兰染色,16Sr DNA测序分析等方法共分离获得66株大肠杆菌,分离率为26.8%;对分离菌株进行药物敏感性检测,结果显示分离菌对四环素,氟苯尼考﹑马波沙星﹑四环素耐药率较高,分别为51.5%﹑59%﹑57.6%;分离菌对恩诺沙星﹑阿奇霉素﹑头孢曲松﹑庆大霉素﹑多黏菌素B呈不同程度耐药性,耐药率分别为45.5%﹑7.5%﹑42.4%﹑21.2%﹑3%;部分菌株呈多重耐药,其中以四重﹑五重﹑七重耐药较多;分离株仅对替加环素和亚胺培南敏感;进一步对66株大肠杆菌进行脉冲场凝胶电泳分型（PFGE分型）,其中14株不能被Xbal酶消化,暂不能分型,其它52株大肠杆菌被分为30个PT,菌株之间相似度为36%-100%,存在克隆传播。2.不同动物源大肠杆菌耐药基因及靶位突变情况分析进一步对分离获得的多重耐药菌进行耐药基因及耐药靶位的检测,结果显示分离菌均携带aph A1耐药基因,可介导对氨基糖苷类药物耐药;部分菌株携带tet A﹑tet W﹑flo R﹑qnr S等耐药基因,分别介导对四环素类﹑氯霉素类﹑喹诺酮类等药物耐药;对7株耐氟喹诺酮类药物菌株的药物靶位进行检测,结果显示分离菌株存在两种不同的突变类型,7株存在gyr A（Ser83Leu/Asp87Asn）和par C（Ser80Ile）位点突变;值得注意的是多重耐药菌C3株不但携带含有add A1﹑dfr A7﹑dfr A17﹑arr-2﹑cml A1等5种耐药基因的基因盒,介导对氨基糖苷类,氯霉素类,β-内酰胺类药物耐药,同时其耐药性可通过结合转移的方式进行水平传播。3.多重耐药株C3的全基因组测序与分析采用ONT全基因组测序平台对筛选到的多重耐药菌株C3进行全基因组测序、分析。结果显示,C3株全基因组全长5,109,751bp,含有两个质粒,携带有71个耐药基因,16个基因岛,946个毒力基因;对两个质粒进行分型,其中Contig00002为Inc FIB（相似度98.39%）或Inc FIC（相似度95.79）,Contig00003为Inc X1（相似度98.93%）,质粒Contig00003中存在一个27kb左右的耐药基因簇及一个新型可移动元件ICE,该元件携带9种耐药基因（flo R﹑cml A﹑bla CTX-M﹑bla OXA10﹑qnr S﹑tet A﹑dfr A﹑aad A1﹑arr）可介导β-内酰胺类﹑氯霉素类﹑四环素类﹑喹诺酮类等药物耐药,同时该质粒还携带IS26﹑ISVsa3和IS102三个复合转座子,转座子内携带bla CTX-M﹑bla OXA10﹑flo R﹑tet A﹑aph（3,）-I等多种耐药基因,其中复合转座子IS26与ICE,ISVsa3均存在耐药基因部分重叠;IS102间携带耐药基因与IS26﹑ISVsa3所携带的耐药基因基本相似;对新型可移动元件ICE进行溯源分析发现,其主要骨架来源于大肠杆菌（登录号CP050201.1）,推测其可能由其它大肠杆菌的ICE进化转移而来。