利用CytoTrap酵母双杂交方法筛选与PRDM1、PRDM14有相互作用的蛋白

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目的:锌指蛋白转录抑制因子1和14(Prdm1、Prdm14)是PRDM家族中的两个成员,在原始生殖细胞(primordialgermcell,PGC)的特化过程中具有重要作用。PRDM1能抑制体细胞分化基因表达;PRDM14不但可以调控PGC的特化而且使其具有诱导多能性。Blimp1(Prdm1)缺失的小鼠只能形成少数的PGC样细胞,同时失去了迁移特性、增值和抑制HOX基因的功能;Prdm14缺失突变的小鼠,Sox2表达量下降,PGC细胞没有发生基因组表观遗传重编程现象。所以,寻找那些与PRDM1、PRDM14有相互作用的蛋白并研究它们之间的作用机制,将对深入了解PRDM1、PRDM14的功能及它们信号传导途径具有重要意义。本课题主旨在于使用CytoTrap酵母双杂交方法从人脾cDNA文库筛分别选出与PRDM1、PRDM14有相互作用的蛋白,为进一步研究二者的功能、调控机制以及信号传导途径提供新的思路和理论依据。  方法:构建Psos-hPRDM-Flag和Psos-hPRDM14-Flag两种重组质粒,摸索了制备酵母cdc25H(α)感受态细胞的最佳条件并获得了大量cdc25H(α)感受态细胞,通过梯度实验确定诱饵基因和文库质粒共转的使用量。利用CytoTrap酵母双杂交筛库的方法,分别以Psos-hPRDM1-Flag重组质粒、Psos-hPRDM14-Flag重组质粒为诱饵从人脾脏cDNA文库中筛选出与其能够发生相互作用的蛋白。  结果:利用CytoTrap酵母双杂交系统从人脾脏文库中成功地筛选出了13种蛋白可能与hPRDM1有相互作用,22种蛋白可能与hPRDM14有相互作用。  结论:成功构建Psos-hPrdm1-Flag和Psos-h Prdm14-Flag两种重组质粒并利用CytoTrap酵母双杂交系统有效地筛选出与之互作的蛋白,为研究hPRDM1和hPRDM14提供了新的切入点。
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