苯脲类除草剂伏草隆免疫检测方法的研究

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伏草隆为内吸选择性土壤处理使用除草剂,属于苯脲类除草剂,这类农药可由地表径流,进入地下水和土壤,容易造成地下水和土壤污染。本实验成功的合成了伏草隆半被原、人工免疫原、酶标抗原、包被抗原,并利用伏草隆人工免疫原制备了具有的高特异性的苯脲类除草剂伏草隆的多克隆抗体。本实验对伏草隆的免疫分析方法进行了深入系统的研究,利用得到的多克隆抗体建立了两种简便、快速、实用的伏草隆免疫分析方法—直接竞争酶联免疫检测方法(ELISA)和免疫层析试纸条方法(GICA)。ELISA方法的灵敏度(IC50)为0.58±0.011μ/L,最低检出限(IC15)为0.08±0.021μg/L。除了与草不隆的交叉反应率为69.4%以外,与其他苯脲类除草剂交叉反应均较小。实验中选择了海河水、井水、自来水和土壤作为检测样品,通过优化条件消除基质影响,确定了样品的前处理方法,对样品进行了添加回收实验,ELISA方法的回收率在70-120%之间,变异系数在3.68-17.90%之间。此外,本实验采用高效液相方法对ELISA方法进行了验证,其相关性方程为y=1.124x+0.056,相关系数r2为0.986,充分说明了建立的伏草隆直接竞争ELISA检测结果的准确性和有效性。免疫层析试纸条的方法检出限20μg/L,选取海河水、自来水、井水阴性水样作为检测样品,分别添加5、10、20μg/L的伏草隆标准品,经0.22μm微孔滤膜过滤后直接上样,经免疫层析试纸条和ELISA检测,结果一致性良好,验证了免疫层析试纸条方法的准确性和有效性。同进本研究对免疫层析试纸条方法的方法特异性进行了检测,除草不隆、绿麦隆对方法的特异性有所影响外,其他苯脲类的除草剂对免疫层析试纸条方法无明显影响。所开发的胶体金试纸条无需检测仪器,操作简单,快速,10min内即可得出检测结果。实验结果稳定性高,可作为水样中伏草隆残留现场大量筛选的有效手段。
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