论文部分内容阅读
目的：通过结构修饰与改造来寻找低毒且抗肿瘤活性高的吴茱萸碱衍生物。为了提高吴茱萸碱的水溶性和降低阿霉素的毒性，制备了聚乙二醇偶联吴茱萸碱的两亲性聚合物胶束并成功负载阿霉素，用于药物的递送。
方法：(1)以取代的色胺和取代的邻氨基苯甲酸为原料，分别合成了中间产物取代的3,4-二氢-β咔啉和7-硝基-N-甲基靛红酸酐，二者通过缩合反应生成硝基吴茱萸碱衍生物。通过氯化亚锡/盐酸还原反应生成两种目标化合物2-氨基吴茱萸碱(8a)和10-甲氧基-2-氨基吴茱萸碱(8b)。(2)在DMAP和EDC·HCl存在下，将羧酸功能化的甲氧基聚乙二醇和氨基修饰的吴茱萸碱衍生物反应生成酰胺键连接的缀合物。由于具有两亲性，通过溶剂挥发法在水溶液中制备了能够自组装的聚合物胶束(mPEG-CO-NH-EVOmicelles和mPEG-CO-NH-EVO-OVH3micelles)。通过紫外法以DPH为探针测定了聚合物胶束的临界胶束浓度。DOX负载的聚合物胶束是通过透析法制备。(3)通过核磁共振氢谱、红外光谱、高分辨质谱对化合物结构进行表征。通过透射电镜观察胶束的形貌，动态光散射仪测定胶束的水合直径及表面电荷分布。用CCK-8法进行细胞毒性实验，评价化合物及聚合物胶束对乳腺癌MDA-MB-231细胞和结肠癌SW620细胞以及正常肝LO2细胞的抗增殖作用。使用流式细胞仪并采用FITC/PI双染进行细胞凋亡的检测。
结论：(1)体外细胞实验表明8a对MDA-MB-231和sw620细胞的抑制作用最强，IC50值分别为0.79和1.282μM。8a对两种癌细胞株的细胞毒性均明显高于吴茱萸碱。流式细胞仪检测细胞凋亡显示8a可诱导MDA-MB-231细胞凋亡。(2)成功制备了两种聚合物胶束mPEG-CO-NH-EVOmicelles和mPEG-CO-NH-EVO-OVH3micelles，胶束的CMC值为分别为200μg/mL和201μg/mL。透射电镜下观察到胶束的形貌为均匀的圆球形，粒径约为40nm。细胞毒性实验表明mPEG-CO-NH-EVOmicelles具有一定的抑制细胞增殖能力，但是作用力低于游离的2-NH2-EVO。(3)通过透析法成功将DOX物理负载到聚合物胶束中，mPEG-CO-NH-EVO/DOXmicelles的载药率和包封率为5.59%和21.71%，mPEG-CO-NH-EVO-OVH3/DOXmicelles的载药率和包封率为6.95%和23.73%。细胞实验表明DOX负载的聚合物胶束的对MDA-MB-231细胞的毒性低于游离的DOX，但是，降低了DOX对正常肝细胞的毒性作用。酰胺键对酸不是特别敏感，在肿瘤微环境中很难迅速断裂并释放药物，导致细胞毒性降低。
方法：(1)以取代的色胺和取代的邻氨基苯甲酸为原料，分别合成了中间产物取代的3,4-二氢-β咔啉和7-硝基-N-甲基靛红酸酐，二者通过缩合反应生成硝基吴茱萸碱衍生物。通过氯化亚锡/盐酸还原反应生成两种目标化合物2-氨基吴茱萸碱(8a)和10-甲氧基-2-氨基吴茱萸碱(8b)。(2)在DMAP和EDC·HCl存在下，将羧酸功能化的甲氧基聚乙二醇和氨基修饰的吴茱萸碱衍生物反应生成酰胺键连接的缀合物。由于具有两亲性，通过溶剂挥发法在水溶液中制备了能够自组装的聚合物胶束(mPEG-CO-NH-EVOmicelles和mPEG-CO-NH-EVO-OVH3micelles)。通过紫外法以DPH为探针测定了聚合物胶束的临界胶束浓度。DOX负载的聚合物胶束是通过透析法制备。(3)通过核磁共振氢谱、红外光谱、高分辨质谱对化合物结构进行表征。通过透射电镜观察胶束的形貌，动态光散射仪测定胶束的水合直径及表面电荷分布。用CCK-8法进行细胞毒性实验，评价化合物及聚合物胶束对乳腺癌MDA-MB-231细胞和结肠癌SW620细胞以及正常肝LO2细胞的抗增殖作用。使用流式细胞仪并采用FITC/PI双染进行细胞凋亡的检测。
结论：(1)体外细胞实验表明8a对MDA-MB-231和sw620细胞的抑制作用最强，IC50值分别为0.79和1.282μM。8a对两种癌细胞株的细胞毒性均明显高于吴茱萸碱。流式细胞仪检测细胞凋亡显示8a可诱导MDA-MB-231细胞凋亡。(2)成功制备了两种聚合物胶束mPEG-CO-NH-EVOmicelles和mPEG-CO-NH-EVO-OVH3micelles，胶束的CMC值为分别为200μg/mL和201μg/mL。透射电镜下观察到胶束的形貌为均匀的圆球形，粒径约为40nm。细胞毒性实验表明mPEG-CO-NH-EVOmicelles具有一定的抑制细胞增殖能力，但是作用力低于游离的2-NH2-EVO。(3)通过透析法成功将DOX物理负载到聚合物胶束中，mPEG-CO-NH-EVO/DOXmicelles的载药率和包封率为5.59%和21.71%，mPEG-CO-NH-EVO-OVH3/DOXmicelles的载药率和包封率为6.95%和23.73%。细胞实验表明DOX负载的聚合物胶束的对MDA-MB-231细胞的毒性低于游离的DOX，但是，降低了DOX对正常肝细胞的毒性作用。酰胺键对酸不是特别敏感，在肿瘤微环境中很难迅速断裂并释放药物，导致细胞毒性降低。