小分子活性物质,如活性多肽、活性氨基酸及其衍生物、胺类物质、脂类介质及气体信号分子等在人体器官结构和功能的稳态维持中发挥着重要的作用。该类物质具有分子量小、结构简单、组织分布广泛、生物效应多样等共同特点,其功能及水平具有重要的发病学意义。其中,生物硫醇是最重要的生物小分子活性物质之一,生物硫醇在人类的多种生物代谢过程（包括氧化胁迫、蛋白修饰、信号传导、细胞凋亡与细胞分化）中发挥着重要的作用。在生物体液中已鉴定出100多种生物硫醇,其中半胱氨酸（Cys）,同型半胱氨酸（Hcy）,谷胱甘肽（GSH）,N-乙酰半胱氨酸（Nac）和半胱氨酰甘氨酸（CysGly）是转硫途径中的主要硫醇。基于巯基化合物的重要生理功能,监测生物体液内Cys、Hcy、GSH、Nac和CysGly的含量对于疾病的早期诊断和疾病进展的评估是非常必要的。目前虽然已经开发出多种检测方法,基本都是对生物硫醇进行衍生化处理后进行富集、分离检测,大多数方法都存在分析过程耗时长、成本高、环境代价大、操作繁琐等问题。纸喷雾电离作为一种新型的敞开式大气压电离技术,不但具有常压电离技术的优点,而且操作简单,无需繁琐的预处理。作为取代传统样品制备和色谱的方法,纸喷雾质谱法证明可在复杂生物样品中对各种分子进行电离,并且具有显著的灵敏度。针对所存在的问题,发展基于纸喷雾质谱检测生物硫醇的方法以对生物硫醇进行快速准确地分析是十分必要的。我们利用设计合成的含有“硒标签”的Ebselen-NH₂探针,开发了一种可在纸质基材上完成生物硫醇快速衍生的纸喷雾电离质谱法。结合离子阱质谱仪器选定的反应监测（selective reaction monitor,SRM）模式,实现了对生物样品中生物硫醇含量的高灵敏度、高选择性、高通量分析。通过选择有代表性的样本,如血液、细胞裂解液等,对其中生物硫醇含量进行快速定性、准确定量,其结果有助于为临床疾病的诊断与治疗提供理论依据。本论文主要包括以下内容:提出了一种将化学衍生与纸喷雾电离相结合的生物硫醇检测方法。该方法设计合成了一种探针Ebselen-NH₂,该探针含有“硒标签”,对生物硫醇有特定响应并且可以通过醛基与氨基发生作用形成席夫碱,从而共价固定在经过氧化处理的纸质基材表面。首先,我们对纸质基材进行处理使其表面羟基（-OH）氧化为醛基（-CHO）,并用2,4-二硝基苯肼（2,4-DNP）对氧化结果进行验证。随后探究了探针Ebselen-NH₂固载的方式,并且对探针用量、孵育时长条件进行了考察。然后探究了影响纸喷雾电离性能的因素,如施加电压、纸质基材尖端与质谱检测口的距离、纸质基材尖端角度和溶剂类型,获得了最佳实验条件。进而在该条件下对纸上进行生物硫醇的衍生效果确认。通过质谱仪器的SRM模式,完成了对五种生物硫醇的定性以及定量检测,并且对血浆样品和细胞裂解液中的生物硫醇进行了分析。实验结果表明,该方法对不同基质在很宽的范围内均具有良好的线性响应,并且检出限低,最低可达0.06 nmol/mL。该方法有望用于其他生物活性小分子物质的检测,将有助于揭示并理解此类活性小分子发挥的生物学与病理学作用,为相关研究提供理论依据。