【摘 要】
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为了研究万寿菊杀菌素的杀菌分子机理,通过诱变筛选获得突变株。在对野生型和突变株进行转录组高通量测序,获得了大量信息的基础上,选取表达差异比较大并与能量代谢有关的丙
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为了研究万寿菊杀菌素的杀菌分子机理,通过诱变筛选获得突变株。在对野生型和突变株进行转录组高通量测序,获得了大量信息的基础上,选取表达差异比较大并与能量代谢有关的丙酮酸脱羧酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶以及和可以被甘油醛-3-磷酸脱氢酶调控的β-微管蛋白进行基因表达及蛋白结构的研究,希望为进一步阐明研究万寿菊杀菌素Ⅱ的分子作用机理提供理论依据。首先对转录组测序结果进行分析,从蛋白表达量、foldchange值、以及p值三方面进行参考,筛选p-微管蛋白、丙酮酸脱羧酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶作为研究对象。接着根据测序结果给出的信息,设计引物,对研究蛋白进行基因克隆。对克隆得到的基因进行测序。根据基因序列对β-微管蛋白、丙酮酸脱羧酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶三个蛋白利用生物信息学分析技术,预测和分析这三个蛋白的ORF、一级结构、空间结构以及部分性质。实验结果为:一、通过基因克隆,得到了β-微管蛋白、丙酮酸脱羧酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶三个蛋白基因的编码序列。二、三种蛋白基因表达量发生变化的原因不是由于基因突变引起的,极有可能是转录调控水平发生了变化的结果。三、通过生物信息学研究可知,甘油醛-3-磷酸脱氢酶、丙酮酸脱羧酶的和β-微管蛋白三种蛋白的结构与其功能是完全相符的。结果说明,万寿菊杀菌剂杀菌机理是多方面的,其中之一就是可能通过改变有关基因表达而起到杀菌作用。
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