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第一部分结直肠癌中BRAFV600E突变与微血管和微淋巴管密度的关系目的:探讨结直肠癌中BRAFV600E突变与微血管和微淋巴管密度的关系。方法:1 收集10例BRAFV600E突变型和20例BRAF野生型结直肠癌患者的病理资料,评估BRAFV600E突变与临床病理特征之间的关系。2用免疫组化法检测30例结直肠癌患者术后组织标本中微血管和微淋巴管密度,分析BRAFV600E突变与微血管和微淋巴管密度的关系。结果:1 BRAFV600E突变与组织分化程度呈负相关（P<0.01）,与术前CA19-9水平呈正相关（P<0.05）,而与性别、年龄、肿瘤部位、黏液组织、TNM分期、淋巴结转移、术前CEA水平、术前血小板计数无相关性;2 BRAFV600E突变型和BRAF野生型CRC组织中微血管密度分别为:为（38.53±17.11）个/高倍视野和（27.54±9.54）个/高倍视野（P=0.03）;微淋巴管密度分别为（9.67±5.63）个/高倍视野和（3.81±2.06）个/高倍视野（P<0.01）。结论:1 CRC中,BRAFV600E突变与组织分化程度差相关,与术前CA19-9水平呈正相关;2 CRC中,BRAFV600E突变与肿瘤组织中微血管和微淋巴管密度呈正相关。第二部分沉默BRAF基因对BRAFV600E突变型结直肠癌细胞来源外泌体诱导的血管及淋巴管生成的影响目的:探讨沉默BRAF基因对BRAFV600E突变型结直肠癌细胞来源外泌体诱导的血管及淋巴管生成的影响。方法:1采用超速离心法分别提取HT29(BRAFV600E突变型)和1627（BRAF基因沉默型）细胞株上清液中的外泌体;用透射电子显微镜观察外泌体的形态结构;用Western blot法鉴定外泌体表面标志物CD9和CD63的表达。2 将HT29细胞株、1627细胞株分泌的外泌体分别与HUVEC共培养,用CCK-8法、划痕实验和成管实验检测HUVEC的增殖、迁移和成管能力。3 将HT29细胞株、1627细胞株分泌的外泌体分别与HLEC共培养,用CCK-8法、划痕实验和成管实验检测HLEC的增殖、迁移和成管能力。4用Western blot法检测HT29和1627细胞来源外泌体中VEGF-A、b FGF、TGF-β1以及VEGF-C蛋白的表达情况。5分别将HT29细胞株、1627细胞株分泌的外泌体与HUVEC共培养24 h,与HLEC共培养48 h,用Western blot法检测HUVEC和HLEC中Claudin-5、Occludin和ZO-1蛋白表达的情况。结果:1本研究成功地分离了HT29和1627细胞上清液中的外泌体;外泌体的直径约为30-150 nm,具有脂质双层膜结构;两种外泌体均表达外泌体表面标志物CD9和CD63。2沉默BRAF基因对BRAFV600E突变型结直肠癌细胞来源外泌体诱导的血管生成的影响（1）与HT29组相比,1627组HUVEC增殖的能力明显下降（P<0.05）;（2）1627组和HT29组细胞的平均迁移率分别为（45.067±2.895）%和（82.863±3.095）%（P<0.01）;（3）外泌体与HUVEC共培养24 h后,1627组和HT29组小管形成的平均数量分别为（12.750±1.887）个/低倍视野和（30.625±0.925）个/低倍视野（P<0.01）。3沉默BRAF基因对BRAFV600E突变型结直肠癌细胞来源外泌体诱导的淋巴管生成的影响（1）与HT29组相比,1627组HLEC增殖的能力明显下降（P<0.05）;（2）1627组和HT29组细胞的平均迁移率分别为（23.327±1.434）%和（42.393±0.247）%（P<0.01）;（3）外泌体与HLEC共培养24 h后,1627组和HT29组小管形成的平均数量分别为（15.375±1.413）个/低倍视野和（26.750±2.016）个/低倍视野（P<0.01）。4 沉默BRAF基因对BRAFV600E突变型结直肠癌细胞来源外泌体中VEGF-A、b FGF、TGF-β1以及VEGF-C蛋白表达的影响与HT29细胞来源的外泌体相比,1627细胞来源外泌体中VEGF-A、b FGF、TGF-β1以及VEGF-C蛋白的表达水平显著降低。5 沉默BRAF基因对BRAFV600E突变型结直肠癌细胞来源外泌体诱导的内皮细胞中ZO-1、Occludin以及Claudin-5表达的影响（1）外泌体与HUVEC共培养24 h后,1627组中ZO-1蛋白含量高于HT29组。（2）外泌体与HLEC共培养48 h后,1627组中ZO-1、Occludin以及Claudin-5蛋白的表达均高于HT29组。结论:1沉默BRAF基因抑制BRAFV600E突变型CRC细胞来源外泌体诱导的血管和淋巴管的生成;2沉默BRAF基因有可能为BRAFV600E突变型CRC的治疗提供思路。