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本研究利用屠宰黄牛卵巢,对卵巢表面2-6mm卵泡卵母细胞的体外成熟(IVM)-体外受精(IVF)-受精卵的体外培养(IVC)进行了系列研究,并探讨了其影响因素,研究结果如下:
1.采用TCM-199、DMEM和M16培养牛卵泡卵母细胞,TCM-199的卵母细胞成熟率最高,结果显示TCM-199是牛卵泡卵母细胞最好的基础培养基。
2.在卵母细胞体外成熟培养液TCM-199中添加新生牛血清(NCS)和人血清的体外成熟率,均显著高于添加牛血清白蛋白(BSA)的体外成熟率,并且此二者之间也差异显著,添加人血清组卵母细胞成熟率更高,证明体外成熟培养液中血清的添加更有利于牛卵母细胞的体外成熟,提示人血清是牛体外成熟培养液中又一重要的血清来源。
3.卵母细胞体外成熟培养液TCM-199中添加5、10和15﹪的人血清,三者体外成熟率差异显著,10﹪浓度的成熟率最高;但添加10和15﹪的人血清卵裂率差异不显著,均显著高于5﹪的卵裂率,表明10﹪的浓度最适于牛卵母细胞的体外成熟培养,但10和15﹪的浓度均可用于牛卵母细胞的成熟培养和体外受精。
4.胰岛素在卵母细胞成熟培养液中的添加对牛卵母细胞的体外成熟没有显著影响,其成熟率差异不显著,表明牛卵母细胞体外成熟培养液中胰岛素的添加不是必须的。
5.采用mTyrode’s和∞液对精子进行获能,结果二者的卵裂率没有显著差异,表明mTyrode’s液和B0液均可用于精子的获能。
6.精子在含有肝素、咖啡因和同时添加咖啡因和肝素的获能液中获能后,前者的卵裂率和后两者差异不显著,但后两者差异显著。证明咖啡因在肝素提高精子运动能力和受精能力时起协同作用,同时作用更能提高精子的活力。
7.在早期胚胎培养中,采用添加葡萄糖、不添加葡萄糖和前期不添加后期添加葡萄糖,比较葡萄糖对早期胚胎发育的影响,结果后者的桑囊率显著高于前两者。证明了葡萄糖对早期胚胎的发育具有抑制作用,但又是后期发育不可缺少的能量物质。