本文主要研究茵陈色原酮和人胆绿素还原酶(hBVR)对于肺癌细胞系A549细胞的作用机制,以及茵陈色原酮是否可以通过调节hBVR对肺癌有作用,旨在说明茵陈色原酮通过对hBVR的调节作为肺癌治疗的新靶点。本实验的重点是培养A549细胞,开始传代造模。实验首先采用体外噻唑蓝比色法MTT法检测不同浓度的茵陈色原酮对A549细胞的增殖活力影响。细胞免疫荧光法将人胆绿素还原酶在A549细胞中定位。Western blot测定给予一定浓度的茵陈色原酮后对于人胆绿素还原酶在A549细胞中表达的变化,确定二者之间的可能存在的关系。采用Western blot检测沉默人胆绿素还原酶后对于抗凋亡蛋白bcl-2和相关凋亡蛋白如不活跃的caspase家族表达情况的影响,以及对ERK1/2通路的影响。将实验分组为分为四组:正常组、转染组、正常+ERK1/2通路抑制剂(U0126)组、转染+ERK1/2通路抑制剂(U0126)组。采用流式细胞术、TUNEL和线粒体膜电位实验方法检测沉默hBVR和抑制ERK1/2通路对细胞凋亡的影响。采用划痕实验和Transwell实验检测沉默hBVR和加入ERK1/2通路抑制剂对A549细胞迁移的影响。MTT结果显示茵陈色原酮可以抑制A549细胞的增殖的活力,在200μmol·L-1浓度时作用效果显著。免疫荧光实验结果表明A549细胞中含有人胆绿素还原酶,并且给予茵陈色原酮可以降低人胆绿素还原酶在A549细胞中的表达。通过Western blot实验证明茵陈色原酮可以降低人胆绿素还原酶在A549细胞中的表达。Western blot结果也表明沉默人胆绿素还原酶后抗凋亡蛋白bcl-2表达下调,凋亡蛋白caspase3和BAX蛋白表达上调,而ERK1/2通路被抑制。流式细胞术、TUNEL和线粒体膜电位实验结果检测到沉默hBVR或加入ERK1/2通路抑制剂,A549细胞凋亡数目增加,正常A549细胞减少。并且发现,同时沉默hBVR和加入ERK1/2通路抑制剂时,A549细胞凋亡数目是最多的。通过划痕实验和Transwell实验结果说明沉默hBVR的表达或加入ERK1/2通路抑制剂,A549细胞迁移被抑制。但同时沉默hBVR和加入ERK1/2通路抑制剂时,A549细胞迁移被抑制是最明显的。最后我们通过实验得出结论,茵陈色原酮可以抑制hBVR在A549细胞中的表达,也可以抑制A549细胞的增殖。同时在整个实验过程中发现,沉默hBVR的表达,可以促进A549细胞凋亡和抑制A549细胞迁移,而这个过程可能是通过抑制ERK1/2通路实现的。所以茵陈色原酮可能抑制A549细胞中hBVR的表达,从而对肺癌的发生发展起到治疗作用。