RSG6是以从水稻(Oryza sativa L.)精细胞与二细胞花粉的差减文库中获得的在精细胞中优势表达的克隆作为探针，筛选水稻精细胞cDNA文库而得到的基因，它与已知基因没有明显的同源性，为新发现基因。我们对该基因进行生物信息学分析，发现RSG6在水稻第8、10号染色体上各有一个完整的拷贝，其同源性片段也出现在第4、12号染色体上。 用地高辛RNA标记试剂盒，采用体外转录方法标记RSG6基因的cDNA序列中长度为258bp的一段作为反义RNA探针，运用RNA原位杂交技术，探讨了RSG6基因的mRNA在水稻根、茎、叶以及花药发育各阶段组织中的分布情况。结果显示，在营养器官和发育早期的花药——花粉母细胞中均未能检测到杂交信号；RSG6基因的活化开始发生于单细胞后期，在花粉成熟过程中，RSG6基因的转录水平逐渐增强，当进入花粉成熟期时，花粉中两个精细胞所含有的RSG6基因的mRNA量达到最高水平。说明RSG6基因主要在水稻精细胞中进行转录，其转录具有明显的时空差异性。对已经从家兔体内获得的抗RSG6蛋白的抗血清进行纯化，将纯化后的多克隆抗体用于水稻各组织器官和雄配子体发育各阶段中RSG6基因表达蛋白的Western-blot分析和免疫定位研究。结果表明，RSG6基因主要在雄配子体发育的后期、尤其是精细胞中表达，是水稻精细胞中的优势表达基因。这一研究结果，与利用原位杂交技术所进行的RSG6的转录时空性研究结果吻合。从分离的精细胞上RSG6蛋白的免疫定位结果来看，RSG6的表达产物主要分布在精细胞的外围，很可能是在细胞膜上，这暗示RSG6基因及其表达产物可能在水稻精细胞的活动——受精作用的信号传导、识别中四川大学博士学位论文发挥作用。 以尺多G‘基因的cDNA中的一段与PBI221中的Cal“v35s启动子连接，转入植物表达载体pB取19中构建反义表达载体pB创19一an以及带有报告基因的PB顶19一an-GUs，转化农杆菌侧，勺西“招对um枷动淤招璐)EHA105后，感染水稻愈伤组织，获得了抗性愈伤组织，其得率分别是27%和21%，转PBm19一an-GUs的抗性愈伤组织经GUS基因片段的PcR检测，阳性率为42.86%。另一方面，将尺义子‘基因全长读码框与表达载体PBllZI连接构建了重组质粒PBllZI.侧沼‘，转化农杆菌，获得了能够使天国G‘基因在其它植物中表达的农杆菌工程菌株，为进一步探讨尺SG石基因的功能打下了基础。 利用已知的尺多G石基因序列和GenBank中提供的尺了G石前导序列设计引物，通过基因组DNA的PCR扩增得到尺乡G石基因的上游片段，分析显示其序列中含有大量的启动子元件。通过设计带有酶切位点的引物扩增出缺失片段PSI、PsZ、PBI、PBZ，利用质粒PBI221中的Gus基因作为报告基因，最后与植物表达载体pB取19连接构建出重组质粒pBIN19一GU万51、pBIN19一G。万52、PBIN19一G之乃旧1、PBIN19一G之巧旧2以及阳性对照PB创19一GUs，利用农杆菌EHA105转化烟草伽‘。才钻阴以故西口翻脚L)和水稻。通过在烟草叶片、成熟花粉和水稻愈伤组织中的瞬时表达，证实这四个缺失片段都具有启动子功能。而且，这四个片段虽然不具有种属特异性和组织特异性，但表现出启动效率上的组织差异性，推测凡9多石基因在不同组织和雄配子发育的不同阶段中表达的差异性很可能就主要是源于其启动子功能的组织差异性。在烟草的稳定转化中，5种重组质粒分别以44.98%、36.94%、42.13%、30.26%和34.26%的比例获得转基因幼苗。为进一步定量地研究尺.义子石基因上游序列的启动子功能奠定了基础。