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本文研究了从条斑紫菜中提取纯化得到的藻胆蛋白在适当波长光源辐照下作为光敏剂治疗恶性肿瘤的可行性以及其在避光条件下清除自由基,提高机体免疫力,起到抗氧化活性的作用。全文分四章。
第一章,作者综述了近年来关于藻胆蛋白的研究进展,肿瘤光动力学的研究历史和进展以及从螺旋藻、多管藻等藻类中提取得到的藻胆蛋白应用于肿瘤光动力学研究的尝试。
第二章,首先通过应用硫酸铵梯度盐析法从条斑紫菜中分离得到藻胆蛋白粗提液。盐析后上羟基磷灰石柱,运用不同浓度的PBS梯度洗脱收集得到红色及蓝色沈脱液再经超滤膜后得到R-藻红蛋白和C-藻蓝蛋白溶液。对其经行吸收光谱测定,蛋白纯度均在4.0以上达到光动力学治疗的公认要求。本章之后以藻红蛋白和藻蓝蛋白为主体,1000w碘钨灯作光源,采用MTT法测定研究了不同浓度(10、25、50和100μg/mL)R-藻红蛋白和C-藻蓝蛋白分别介导的光动力效应对人肝癌细胞7721和人喉癌Hep-2细胞的生存率的影响。实验结果显示:两种藻胆蛋白的光动力作用对7721和Hep-2细胞都具有杀伤作用。在浓度为100μg/mL,照射剂量为50 J/cm2的条件下,C-藻蓝蛋白对应的7721和Hep-2细胞的存活率分别72%为64%,R-藻红蛋白对应的仅为61%和57%;单用碘钨灯处理,细胞的存活率都高于82%;而单独使用这两种藻胆蛋白处理细胞,24h后并未对其生长造成抑制,但在持续培养72 h后,高浓度蛋白(50、100μg/mL)对细胞生长具有显著的抑制效果。本章实验证明条斑紫菜R-藻红蛋白和C-藻蓝蛋白可在碘钨灯激激发下对7721和Hep-2细胞产生光敏杀伤作用。
第三章,作者在之前实验研究的基础上,换用氩离子激光器和He-Ne激光器作光源分别对应激发R-藻红蛋白及c-藻蓝蛋白。在提高藻胆蛋白浓度的前提下,研究了包括藻胆蛋白介导的激光光敏对体外培养的人肝癌细胞7721的杀伤作用,光敏辐照后不同时间段7721细胞的凋亡率,同时通过建立小鼠B16肿瘤模型研究了不同浓度藻胆蛋白经激光激发后对实体瘤生长的影响情况。实验结果表明,光子能量更强的激光器可进一步提高藻胆蛋白在体外对7721细胞的杀伤作用,如120μg/MLR-藻红蛋白在1OOJ/cm2累计能量辐照下对应的细胞存活率仅为27%。同时,藻胆蛋白在经激光辐照后可随时间诱导细胞凋亡,120μg/mLC-藻蓝蛋白在100的累计辐照能处理8h后对应得到的7721的细胞凋亡率达32.54%。而通过对小鼠B16肿瘤模型的治疗研究,作者发现1mg/mL及2mg/mL的R-藻红蛋白在200J/cm2的氩离子激光器的辐照下可于治疗7天后抑制实体瘤的生长。第四章主要研究条斑紫菜藻胆蛋白在避光条件下的抗氧化活性。在选用不同浓度藻胆蛋白粗体液对小鼠连续灌胃30天后,作者记录了小鼠体重及免疫器官的变化数据,利用试剂盒检测了实验鼠血清的SOD、GSH-PX活力大小,肝组织MDA含量的高低。实验结果表明藻胆蛋白粗提液可增大小鼠的免疫器官;300mg/mL蛋白粗提液组可显著提高小鼠血清SOD、GSH-PX的活力,显著降低其肝组织MDA的生成。本文还研究了R-藻红蛋白,c-藻蓝蛋白在体外对有机自由基DPPH的清除作用,对由H2O2诱导的小鼠红细胞溶血,肝组织MDA生成的作用的影响。结果表明0.8mg/mL的藻胆蛋白为清除DPPH的最佳浓度,0.12mg/mL及0.2mg/mL的藻胆蛋白则分别为抑制小鼠红细胞溶血及肝组织MDA生成的最佳浓度。